赵志东，郇金亮，汤文俊，秦贤举

    ·论著·

    hsa-miR-21-5p/ZNF367分子轴通过PI3K/Akt通路影响胃癌细胞的增殖和迁移

    赵志东，郇金亮，汤文俊，秦贤举

    200235 上海市第八人民医院普外科

    探讨ZNF367 通过 PI3K/Akt 通路抑制胃癌(GC)细胞的增殖和迁移，并初步探讨其作用分子机制。

    收集 2015 年 8 月– 2018 年 10 月上海市第八人民医院普外科手术切除的 GC 组织(非坏死部分)和相邻癌旁组织(距肿瘤组织 > 3 cm)标本 46 例，同时选取正常人胃黏膜上皮细胞 GES1 及 GC 细胞系 MGC-803 和MKN-45。采用 qRT-PCR、Western blot 实验检测 ZNF367 和 hsa-miR-21-5p(miR-21-5p)在组织和细胞系中的表达情况，进行 Kaplan-Meier 生存分析得出总生存期；利用脂质体 LipofectamineTM2000 转染寡核苷酸片段 miRNA-NC、miR-21-5p mimic 和 miR-21-5p inhibitor 至 MGC-803 细胞，通过 CCK8 法和划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力；采用双荧光素酶报告载体系统验证 ZNF367 和 miR-21-5p 的作用靶点，采用 qRT-PCR、Western blot 实验检测 miR-21-5p mimic 和 miR-21-5p inhibitor 转染 MGC-803 细胞中 ZNF367、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 以及 PI3K/Akt 通路中 p-PI3K 和 p-Akt 的表达情况。

    ZNF367 在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达水平分别显著低于癌旁组织和 GES-1 细胞(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 组织样本 采集 2015 年 8 月– 2018 年 10 月上海市第八人民医院普外科手术切除 46 例胃癌患者癌组织及配对的癌旁组织标本(距肿瘤组织 > 3 cm)，所有标本取出后立即放入液氮中，并于–80 ℃长期保存。手术前未进行过任何放疗或化疗等治疗。组织样本的收集和使用征得患者同意并签署知情同意书，并获得上海市第八人民医院伦理委员会的批准。

    1.1.2 细胞系及主要试剂 胃癌细胞(MKN-45、MGC-803)以及人胃黏膜上皮细胞(GES-1)细胞购自中科院昆明细胞库；RPMI1640、DMEM 培养基、胰蛋白酶和胎牛血清均购自美国 Gibco 公司；Trizol 和 LipofectamineTM2000 试剂盒购自美国 Invitrogen 公司；RNA 提取试剂盒和荧光定量 PCR 试剂盒 SYBR premix Ex TaqTM购自日本 Takara 公司；CCK8 试剂盒购自江苏晶美生物科技有限公司；双荧光素酶检测试剂盒购自美国 Promega 公司；抗 ZNF367、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K、p-Akt 和 GAPDH 抗体以及二抗均购自美国 Abcam 公司；ECL 化学发光显色液购自北京索莱宝公司 ......