张大鹏，杨艳辉

    ·论著·

    LncRNA NR2F2-AS1靶向抑制miR-129-5p调控胶质瘤细胞增殖和凋亡的机制研究

    张大鹏，杨艳辉

    453000 河南，新乡市中心医院神经外科(张大鹏)；453600 河南，辉县市人民医院超声科(杨艳辉)

    研究 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤 U251 细胞增殖和凋亡的影响。

    qRT-PCR 检测 lncRNA NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 在胶质瘤组织和细胞中表达水平，MTT 法和流式细胞术检测 U251 细胞增殖和凋亡，Western blot 检测细胞中CyclinD1、p21、Bax 和 Bcl-2 的蛋白表达水平，双荧光素酶报告系统验证 NR2F2-AS1 和 miR-129-5p 的调控关系。

    与正常脑组织相比，在胶质瘤组织中 lncRNA NR2F2-AS1 的含量显著升高(1 材料与方法

    1.1 材料

    2016 年 6 月– 2017 年 6 月于本院病理检查确诊为胶质瘤的患者 20 例，其中男 12 例，女8 例，年龄 21 ~ 65(43.2 ± 14.8)岁，胶质瘤分级：I 级 2 例，II 级 5 例，III 级 8 例，IV 级 5 例。留取 20 例患者手术切除的胶质瘤组织，同时选择 20 例志愿者(脑外伤行颅内减压手术患者)正常脑组织作为对照。所有患者术前未接受放疗和化疗。本研究通过医院医学伦理委员会批准，并与所有患者或其家属、志愿者签订知情同意书。

    人胶质母细胞瘤细胞株 U251 购自美国 ATCC；高糖 DMEM 培养基和胎牛血清(FBS)购自美国 Gibco 公司；胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)和二甲基亚砜(DMSO)购自美国 Sigma-Aldrich 公司；Trizol 试剂、Real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒(RT-PCR)和 Lipofectamine 2000 转染试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司；流式细胞仪和流式试剂盒购自美国 BD 公司；NR2F2-AS1 干扰剂(si-NR2F2-AS1)、NR2F2-AS1 过表达载体(pcDNA-NR2F2-AS1)、miR-129-5p 模拟物(miR- 129-5p)、miR-129-5p 抑制剂(anti-miR-129-5p)、阴性对照(si-NC、miR-NC、pcDNA、anti-miR-NC)、NR2F2-AS1 野生型和突变型双荧光素酶报告载体均购自上海吉玛制药技术有限公司；CyclinD1 抗体、p21 抗体、Bax 抗体、Bcl-2 抗体和 GAPDH 抗体购自美国 Santa Cruze 公司；双荧光素酶报告系统购自美国 Promega 公司；全自动酶标仪及 Real-time PCR 仪购自美国 Bio-Rad 公司 ......