于华杰，李浩，李胜

    ·论著·

    新型荧光探针组合用于循环肿瘤细胞中鉴定的研究

    于华杰，李浩，李胜

    250220 济南，济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院/山东省肿瘤医院肝胆外科(于华杰)；250062 济南，山东省药物研究院(李浩、李胜)

    验证新型荧光探针组合鉴定循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性，建立一种新的鉴定 CTCs 的方法。

    选取 Eca-109 和 HeLa 两种肿瘤细胞系，将肿瘤细胞系制作成单细胞悬液代替 CTCs，对其进行分离、荧光探针组合染色和瑞氏吉姆萨染色，分别观察染色的肿瘤细胞的形态，对比测量到的肿瘤细胞形态学特征，包括细胞长径、细胞核长径、细胞表面积和核质比，计算新型荧光探针组合与瑞氏吉姆萨分别染色肿瘤细胞系的符合率。在此基础上，课题组选取5例次肿瘤患者，按照上述实验方法进行临床验证，观察新型荧光探针组合染色 CTCs 的情况。

    分析瑞氏吉姆萨染色和荧光探针组合染色 Eca-109 和 HeLa 的细胞形态学结果，发现细胞长径、细胞核长径、细胞表面积和核质比均无差异；对两种肿瘤细胞系的细胞形态学结果的均数分析发现也无差异。因此，课题组认为瑞氏吉姆萨染色和荧光探针组合染色的同一肿瘤细胞系在形态学上是一致的。在 5 例次临床验证实验中，新型荧光探针组合染色检出 2 例次。

    建立的新型荧光探针组合可用于 CTCs 的检测。

    荧光探针； 循环肿瘤细胞； 鉴定； ISET； 瑞氏吉姆萨染色

    随着发病率和死亡率的增加，癌症已经成为我国最主要死亡原因之一[1]。其中超过 90%的癌症患者死于肿瘤转移[2]。1889 年英国病理学家 Paget[3]指出循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)作为“种子”在肿瘤发生、转移过程中起了重要的作用。循环肿瘤细胞是指自发或因诊疗操作自肿瘤原发灶或者转移病灶脱落进入外周血循环系统的肿瘤细胞[4]。CTCs 的检测是一个复杂的过程，涉及细胞分离、富集和鉴定，检测 CTCs 的关键在于如何提高 CTCs 的截留率和如何对截留的细胞进行识别鉴定[5-6]。鉴定 CTCs 的方法按照其应用的原理不同，可归纳为 4 类，即：形态学鉴定方法、免疫学鉴定方法、遗传学鉴定方法和细胞生物化学鉴定方法[7-12]，目前尚无明确的鉴定 CTCs的“金标准”。CTCs 是癌细胞的一种特殊存在方式[13]，课题组认为解决 CTCs 鉴定的方法可以借鉴传统病理学对癌细胞的鉴定。目前活检是传统病理学临床疾病诊断的金标准[14] ......