张汝倩，洪恩宇，于永波，任慧敏，耿迪，杨慧，王雅頔，周萍萍，鲁洁，郭永丽

    作者单位：100045 北京，国家儿童医学中心(北京)首都医科大学附属北京儿童医院，北京市儿科研究所儿童耳鼻咽喉头颈外科疾病北京市重点实验室(张汝倩、洪恩宇、于永波、任慧敏、耿迪、杨慧、王雅頔、周萍萍、鲁洁、郭永丽)；儿童临床数据和样本资源库(洪恩宇、于永波、任慧敏、耿迪、杨慧、王雅頔、周萍萍、鲁洁、郭永丽)

    RNA 在人类多种生理和病理过程中发挥着举足轻重的作用。近些年来，随着分子生物技术在生命科学、医学等方面的广泛应用，以 RNA 为靶标进行的组织及细胞的分子生物学研究较为广泛。在 RNA 的科学研究中，高质量 RNA可满足 RT-PCR、Northern blot、基因表达谱、转录组测序和阵列分析等生物学实验的研究需求[1-2]，所以能够获得具有生物活性及化学稳定的完整 RNA 分子至关重要。然而由于 RNA 自身结构特性[3]和环境中广泛分布的核糖核酸酶(Ribonuclease，RNase)[4]，从血液、组织或培养的细胞中抽提得到的 RNA 的稳定保存相对困难。

    目前，有关 RNA 浓度和纯度的影响因素研究主要集中在提取方法、样本类型、储存温度和时间等方面，有文献报道不同的放置时间和温度会影响 RNA 提取的质量浓度，但保存时间对 RNA 的纯度影响各报道结论不统一[5-6]。根据临床检测和科研的需要，提取后 RNA 保存条件和时间对RNA 浓度和纯度的影响也同样非常重要。同时，我们查询文献发现提取后 RNA 的保存温度和放置时间对 RNA 的质量影响也有所不同[7-8]，不同浓度的 RNA 反复冻融对其浓度和纯度的影响也鲜有报道。所以，本文通过探讨不同浓度的 RNA 在 4 ℃ 及常温条件下放置不同时间，评估其对RNA 浓度和纯度的影响；另外，通过反复冻融不同浓度的RNA，研究不同浓度的 RNA 冻融次数对其浓度和纯度的影响，以期为临床检测和科学研究提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要设备 4 ℃ 和–80 ℃ 冰箱均为三洋产品；300 servies AE 生物安全柜和 NanoDrop 分光光度计均购自美国 Thermo 公司；1 L 便携式液氮罐、高速冷冻离心机均购自德国 Eppendorf 公司；OSE-Y10 电动组织研磨器购自美国 Qiangen 公司。

    1.1.2 主要试剂 AllPrep DNA/RNA Mini Kit 购自美国Qiangen 公司；β-巯基乙醇等试剂购自国药集团化学试剂有限公司 ......