王虓宇，江文文，胡文著，杭赛虎，赵宏，陈溢娟，赵云蓉，柏会文，赵宸，梁疆莉

    百日咳是由革兰氏阴性鲍特氏杆菌(Bordetella Pertussis，B.p)引起的急性呼吸道感染性疾病。百日咳杆菌可在各年龄组的人群中引起较高的发病率，而且可对未接种疫苗的婴儿形成生命威胁[1]。全菌体的百日咳疫苗(whole-cell pertussis vaccine，wP)于 20 世纪 30年代成功研制后，在 40年代得到了大规模的应用。但是因为 wP 伴随着很多严重的副反应，如伴有或不伴有发热性痉挛、肿胀、疼痛以及注射部位红肿甚至高热、惊厥以及脑病等[2]。为了减少这些副反应的发生率和程度，Sato等[3]设计了一种用共纯化方式获得的无细胞百日咳疫苗(aP)。含百日咳杆菌 1 ～ 5 个组分的 aP 上市后便广泛替代 wP 使用至今[4]。虽然疫苗是预防此疾病最有效的工具，但并不是 100% 的有效[5]。即使在疫苗覆盖率超过 90% 的国家，每年感染率仍达到 1% ～ 7%[2,6-7]。全球百日咳发病率的增加可能反映了检测方法学灵敏度的提高、疫苗诱导的保护力以及诱导的保护时间的有限以及病原体的适应和进化[8-11]。其中一个很重要的因素可能是目前使用的 aP 无法在基础免疫后诱导强效的细胞免疫，而强效的细胞免疫是疫苗介导长期保护的必要条件[12]。

    有研究表明，TLR4 配体 LPS 的存在是 wP诱导的免疫反应更偏向于 Th1 反应的一个重要因素[13]。在 aP 中加入 TLR4 配体作为佐剂能诱导更理想的细胞免疫反应[13-14]。无毒性的单磷酸脂质A(MPLA)来源于沙门氏菌的脂多糖。一些临床前研究显示，MPLA 可以诱导 IL-2 和 IFN-γ 的合成和释放，从而促进了 Th1 细胞反应的产生[15-16]。本研究拟利用实验室前期建立的百日咳气雾攻击动物模型开展用常规的 aP[含百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、黏附素(PRN)以及铝佐剂)]作为基础疫苗，研究加入 MPLA 佐剂后对 aP 的免疫效果影响。通过动物实验研究试验疫苗在动物体中介导的免疫反应差异，特别是 Th1 和 Th2 的差异，评价 MPLA 佐剂的添加对改善 aP 的免疫效果，从而为后续新型的疫苗研发奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 疫苗 无细胞百日咳疫苗的三个抗原组分PT、FHA 和 PRN 由中国医学科学院医学生物学研究所自主制备；MPLA 购自美国 Avanti 公司；PT、FHA、PRN 及 MPLA 分别用氢氧化铝佐剂吸附制成原液 ......