邓春平，陈航，谢建华，刘翠华

    肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)在炎症反应中起重要作用。TNF-α 主要由活化的单核巨噬细胞合成、分泌；反过来又以自分泌和旁分泌的方式激活单核巨噬细胞，使其释放大量 IL-1、IL-6、IL-8、PGE2 等炎性介质，激发炎症连锁反应[1-2]。阿达木单抗系由中国仓鼠卵巢细胞表达的重组全人源抗 TNF-α 单克隆抗体，可以拮抗 TNF-α 与靶细胞膜上受体的结合，终止或者减弱炎症反应的进行，这对治疗 TNF-α 引起的炎症反应等相关疾病具有重要意义[3-5]。作为治疗性抗体，其与抗原的结合活性是反映其作用机制和药效学的重要指标，是该类产品的关键质量属性[6-7]。目前，抗体结合活性常用方法是酶联免疫吸附法(ELISA)[6-9]，但此方法操作过程较繁琐，费时费力。因此，开发一种快速、简便的测定方法以满足细胞克隆筛选、生产工艺开发、产品质量研究、放行检测及稳定性研究等需求非常有意义。

    均相时间分辨荧光技术(homogeneous time-resolved fluorescence，HTRF)是近年来发展起来的一种可用于检测纯液相体系中受体与配体结合的新技术，该技术结合了时间分辨荧光(time-resolved fluorescence，TRF)和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，FRET)两种技术。TRF 技术利用了稀土元素中镧系元素的独特性质，其比传统荧光基团具有更大的斯托克斯位移和更长的发射半衰期；通过设定适当的延迟和门控时间，以激发光激发待测产物，短半衰期的背景荧光信号会在延迟时间内衰减及消失，而后对荧光信号进行采集，可获得长半衰期的荧光信号，再根据荧光强度对待测物进行定性或定量分析。TRF 技术可有效降低背景短半衰期荧光的干扰，提高检测灵敏度[10-11]；常用的镧系元素有铕(Eu)和铽(Tb)。FRET 是指电子激发能在适当的能量供体与能量受体之间进行传递。当一个供体荧光团和一个受体荧光团距离足够近时(激发光谱相重叠时)，光子能从受激发的供体荧光团转移到受体荧光团，从而激发受体荧光团使其发出特定波长的荧光，同时供体荧光团自身的荧光强度发生衰减；供体荧光团与受体荧光团分别标记可发生相互作用的两个生物分子，当两个生物分子发生结合时，可以将能量供体和受体拉到足够近的距离，从而发生能量转移[11-12]。由于受体荧光团的发射光来自于能量转移，因此检测过程无需将未结合与已结合的生物分子分开，即无洗涤或分离步骤 ......