张园园，田芳园，尤明强，王凯，彭晨，赵爱华，魏东

    ·技术与方法·

    布鲁氏菌噬菌体国家参考品的研制

    张园园*，田芳园*，尤明强，王凯，彭晨，赵爱华，魏东

    102629 北京，中国食品药品检定研究院结核病疫苗和过敏原产品室/国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室(张园园、赵爱华、魏东)；730046 甘肃，兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室(田芳园、尤明强、王凯、彭晨)

    布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌引起的一类人畜共患疾病。我国现人用布病疫苗为皮上划痕人用布鲁氏菌活疫苗。2020 版《中国药典》三部收录的皮上划痕人用布鲁氏菌活疫苗鉴别试验采用噬菌体裂解方法，所用噬菌体为布鲁氏菌 Tb 噬菌体[1]。但目前缺少效价高、稳定性好的布鲁氏菌 Tb 噬菌体参考品，影响布鲁氏菌活疫苗鉴别试验结果判定。中国食品药品检定研究院在已完成鼠疫噬菌体和炭疽噬菌体国家参考品研制的基础上[2-3]，建立了效价高且稳定性良好的布鲁氏菌 Tb 噬菌体参考品，为布鲁氏菌活疫苗的鉴别试验提供保障。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 菌种及噬菌体 布鲁氏菌(CMCC55010)、鼠疫耶尔森氏菌(CMCC52006)、小肠结肠炎耶尔森菌(O:3)(CMCC52203)、小肠结肠炎耶尔森菌(O:8)(CMCC52211)、小肠结肠炎耶尔森菌(O:9)(CMCC52212)、伤寒沙门菌(CMCC50071)、甲型副伤寒沙门菌(CMCC50001)、炭疽芽孢杆菌(CMCC63001)、志贺菌(CMCC51105)、大肠埃希菌(CMCC44113)、布鲁氏菌噬菌体 Tb 株，均为中国食品药品检定研究院保存。

    1.1.2 皮上划痕人用布鲁氏菌活疫苗 批号为：202004004、202004005、202004006、202012007、202012008 及 202101001，为兰州生物制品研究所有限责任公司生产。

    1.1.3 试剂 营养肉汤、胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)、胰酪大豆胨液体培养基(TSB)均购自北京三药科技开发公司；细菌浓度测定用中国细菌浊度标准品由中国食品药品检定研究院提供。

    1.1.4 仪器 NU-437-600S 型生物安全柜购自美国 Nuaire公司；MIR-153 型恒温培养箱购自日本三洋公司。

    1.2 方法

    1.2.1 噬菌体裂解特异性研究 将布鲁氏菌、鼠疫耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌(O:3、O:8、O:9 血清型)、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、炭疽芽孢杆菌、志贺菌、大肠埃希菌等 10 株细菌接种 TSA 培养基平板 ......