吕玲，邢义高，张秀涛，雒猛，刘国军

    ·技术与方法·

    通用型细胞冻存保护液的探索

    吕玲，邢义高，张秀涛，雒猛，刘国军

    250102 济南，山东省齐鲁干细胞工程有限公司

    在过去十年中，我国在细胞治疗领域制定了一系列重要的政策和法规[1-3]，政策的支持使得包括干细胞和免疫细胞治疗在内的细胞治疗领域的发展进入快车道。然而细胞制品不同于其他制品，细胞需要具备高效的生物活性才能发挥其独特的治疗功能。目前临床应用的细胞产品分为新鲜细胞和冻存细胞，新鲜细胞存在一定的检测结果延滞和保存时间短的缺点，冻存细胞产品具有细菌、病毒等各类检测数据完整，细胞特性稳定等优势，冻存细胞产品势必成为未来干细胞和免疫细胞等细胞治疗[4]的主流产品。

    冻存细胞产品的有效性和稳定性主要取决于冻存保护液[5]，目前细胞冻存保护液中往往含有胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、自体血浆或(minimum essential medium，MEM)培养基等[6]，这些成分大大限制了冻存细胞产品的临床应用。本实验旨在优化冻存保护液的成分，探索一种无动物源的可直接临床注射级别的通用型细胞冻存保护液，为进一步的临床应用奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 样本 脐血样本由山东省脐血库提供，异体脐带由山东省细胞组织库提供，均具备捐献者的知情同意书。

    1.1.2 主要试剂 0.9% 氯化钠注射液和 5% 复方氨基酸注射液均购自辰欣药业；20% 人血白蛋白购自 Baxter；DMSO(CE 认证 USP 级冻存液)购自美国 OriGen BioMedical；小儿电解质补给注射液和 6% 右旋糖酐 40 葡萄糖注射液均购自石家庄四药有限公司；6% 羟乙基淀粉购自山东华鲁制药有限公司；CD34、CD44、CD45、CD90、CD3、CD56 等单克隆抗体购自美国 BD 公司；BI 冻存保护液购自以色列 Biological Industries。

    1.1.3 仪器 二氧化碳培养箱为 Heal Force 公司产品；离心机为美国赛默飞产品；生物安全柜为苏净安泰公司产品；流式细胞仪为美国 BD 公司产品；细胞计数仪为 Countstar 公司产品；五分类血细胞计数仪为日本希森美康公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞冻存保护液的配制 按照体积比配制不同的细胞冻存保护液，冻存保护液 A：80% 自体血浆 + 10% 二甲基亚砜(DMSO)+ 10% 右旋糖酐；冻存保护液 B：10% 人血清白蛋白(human serum albumin ......