王珊珊，陈琼，许美凤，李亚南，徐颖华，叶强

    ·技术与方法·

    三种不同血清型肺炎球菌多糖国家参考品的研制

    王珊珊*，陈琼*，许美凤，李亚南，徐颖华，叶强

    102629 北京，中国食品药品检定研究院，卫健委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

    肺炎球菌感染是导致老年人死亡的主要原因之一，WHO 将其列为 12 种造成严重疾病负担的重点致病菌之一，且耐药性肺炎球菌的出现对当前临床治疗造成很大的挑战[1]。大量研究证实疫苗的免疫接种是预防和控制肺炎球菌感染最经济、最有效的措施。当前针对成人肺炎球菌感染的预防性疫苗主要为覆盖了已报道的 65% ～ 91% 血清型分离菌株的 23 价肺炎球菌多糖疫苗(PPV23)[2-3]。多糖作为 PPV23 中有效组分，与疫苗的免疫原性密切相关。因此，疫苗中不同血清型多糖的含量是确保 PPV23 质量有效、稳定的最重要质控指标之一[4-5]。

    2020 年版《中国药典》推荐应用特异性速率比浊方法对PPV23 中所含有各型多糖含量检测[6]，当前有四款PPV23 产品在国内上市，使用各自企业研制的内控品进行多糖含量检测，因此，为了加强不同企业生产的疫苗中多糖含量的质量控制，本研究研制了2、8 和 10A 三种血清型肺炎球菌多糖国家参考品，以期为后续PPV23 产品质量控制提供物质基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂 2、8 和 10A 血清型多糖候选参考品由成都生物制品研究所有限责任公司提供；10 μg/ml 型的肺炎球菌多糖标准品(批号：PN-PV-01Mar2016)、内部质控品(批号：00118241.0000393)由 Merck Sharp & Dohme Corp. 惠赠；不同血清型因子血清标准品购自丹麦血清研究所；IMMAGE800 缓冲液、IMMAGE800 稀释液和 IMMAGE800 洗液购自美国 Beckman 公司；其他试剂为国产分析纯。

    1.1.2 仪器与设备 免疫化学分析系统(IMMAGE800)购自美国 Beckman 公司；AVANCE-600 型超导核磁共振波谱仪(包括自动进样器和 TopSpin 工作站)购自德国布鲁克公司。

    1.2 方法

    1.2.1 不同血清型多糖候选参考品的血清型别鉴定 参考文献[7]方法，采用1H 核磁共振法对不同血清型多糖候选参考品的型别鉴定。采用 zg30 脉冲序列采集1H-NMR 数据 ......