孟金凤，闫攀登，董志忠

    原发性肝癌是目前我国常见恶性肿瘤，主要包括肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)、肝内胆管癌(intrahepatic cholan giocarcinoma，ICC)和 HCC -ICC 混合型 3 种不同病理类型，其中HCC 占到 85%～90%[1]。肝癌发病隐匿、恶性程度高、预后较差，严重威胁国民的生命和健康[2]。siRNA 核酸药物分子量小，设计便利，通过靶点基因 mRNA 配对降低其表达水平，无免疫原性，近年来已有约 10 种基于 RNAi 技术治疗癌症的药物进入临床试验[3]。然而筛选 siRNA 需要综合其表达水平、基因功能和稳定性等因素，其中评估siRNA 口服过程经消化系统后的稳定性是个迫切需要解决的问题[4]。

    腺苷酸环化相关蛋白 2(adenylate cyclase-associated protein 2，CAP2)属于环化酶相关蛋白家族成员，N-端结构域可结合 Ras 响应的腺苷酸环化酶，C-末端结构域含有肌动蛋白(actin)结合的区域[5]。研究显示 CAP2 在肝癌组织中高表达，而在正常肝组织中不表达或表达较弱，高表达CAP2 的患者较低表达 CAP2 的患者死亡率高，促进肝癌细胞的上皮间质转化，在肝癌的发生或发展中起到“致癌基因”的角色[6-7]。因此，该研究进一步采用 siRNA 技术在肝癌细胞系中敲低 CAP2的表达，观测其对肝癌细胞系迁移和侵袭，耐药性的影响，并采用仿生模拟上消化道技术进一步评估siCAP2 核酸分子经上消化道系统的稳定性。以期为抑制肝癌转移或抗药性提供新的科学技术方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 肝癌组织和癌旁组织的样本 本研究入选的肝癌患者的样本于 2015 年取自浙江大学附属第一医院以及北京肿瘤医院。该实验经军事医学科学院伦理学委员会批准。入选的患者具备以下条件：①确诊的 HBV 相关的原发性肝细胞癌患者；②术前未经化疗或介入治疗；③所选肿瘤组织应避免坏死，尽量为生长活跃区；非肿瘤肝组织取自手术可以得到的距离肿瘤边界最远处的肝组织(距癌组织至少 2 cm，镜下无癌灶)，更多细节见文献[8]。

    1.1.2 细胞系 人正常肝细胞 LO2 细胞系、肝癌细胞系 HepG2、HCCLM3、Bel-7402、SMCC-7721和 MHCC-97H 均购自中国细胞资源库，并在本实验室的样本库保存。

    1.1.3 主要试剂 细胞培养所用培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium ......