孙悦，胡馨月，丁晓丽，李晶，吕萍，张慧，梁成罡

    ·论著·

    人胰岛素及其类似物中残留溶剂测定方法研究

    孙悦，胡馨月，丁晓丽，李晶，吕萍，张慧，梁成罡

    102629 北京，中国食品药品检定研究院激素室/国家药品监督管理局化学药品质量研究与评价重点实验室

    建立人胰岛素及其类似物中有机溶剂残留测定方法，用同一方法测定目前在人胰岛素及类似物生产工艺中普遍存在的甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇 5 种残留溶剂。采用顶空气相色谱法，使用 DB-624 毛细管柱(30 m × 0.53 mm，3 μm)，载气为氮气，流速为 2.5 ml/min，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为 250 ℃，进样口温度为 200 ℃，分流比为 5:1，顶空平衡温度为 85 ℃，平衡时间为 20 min，柱温程序为：起始温度 40 ℃，保持10 min，随后以 5 ℃/min升至 80 ℃，随后以 20 ℃/min 升至 200 ℃。甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈及正丙醇峰之间分离良好；专属性、耐用性、精密度良好；甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇分别在 1.5 ～ 60.8、1.1 ～ 98.9、0.8 ～ 100.4、0.7 ～ 10.4、0.8 ～ 100.1 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(2均大于 0.99)；甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇检出限分别为 0.6、0.3、0.2、0.2、0.2 μg/ml，定量限分别为 1.5、1.1、0.8、0.7、0.8 μg/ml；各溶剂在人胰岛素及其类似物中平均加标回收率(n = 9)均在 90% ～ 110% 范围内，准确度良好。该方法可操作性强、准确、灵敏度高，适用于人胰岛素及其类似物中甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和正丙醇 5 种残留溶剂测定。

    人胰岛素及其类似物； 顶空气相色谱法； 残留溶剂； 方法学验证

    人胰岛素及其类似物由重组 DNA 技术制备得到，是 1 型糖尿病患者的基本治疗方法，也是许多长期 2 型糖尿病患者常见的治疗选择[1]。人胰岛素由 A、B 两条以分子间二硫键连接起来的肽链组成，A 链 21 个氨基酸，B 链 30 个氨基酸，胰岛素类似物在人胰岛素结构基础上进行氨基酸替换和脂肪酸链化学修饰，以改变吸收速率、作用持续时间、提高作用的再现性，并调节各种靶组织中的相对功效[1-3]。

    药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂[4]。人胰岛素及类似物下游生产工艺步骤包括包涵体清洗、包涵体溶解、胰岛素原融合蛋白提取、缓冲液交换、胰岛素原纯化、胰岛素原复性、酶切、胰岛素纯化、结晶和冻干等步骤[5] ......