张园园，靳娟，彭文轩，周亚洲，赵爱华，崔玉军，杨瑞馥，郭彦，魏东

    ·质量控制·

    鼠疫耶尔森菌基因分型国家参考品研制

    张园园*，靳娟*，彭文轩，周亚洲，赵爱华，崔玉军，杨瑞馥，郭彦，魏东

    102629 北京，中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术检定方法及其标准化重点实验室(张园园、赵爱华、魏东)；811602 西宁，青海省地方病预防控制所(靳娟、彭文轩)；100071 北京，军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室(周亚洲、崔玉军、杨瑞馥、郭彦)

    鼠疫是由鼠疫耶尔森菌()(简称鼠疫菌)引起的一种自然疫源性疾病，以发病急、传播快、病死率高为特征，对人类社会影响巨大。鼠疫主要在啮齿类动物中引起原发性感染，病原菌经鼠蚤传播给人，其引起的疾病主要包括腺鼠疫、肺鼠疫和败血型鼠疫 3 种类型。其中肺鼠疫发病迅猛，可通过空气在人间传播，病死率极高[1]。人类历史上曾发生过三次鼠疫大流行，造成上亿人死亡。时至今日，很多地区，如非洲、亚洲、美洲，仍将鼠疫视为可能会死灰复燃的烈性传染性疾病之一[2-4]。

    鼠疫菌被列为重要的生物战剂和生物恐怖剂，一直受到各国高度重视。鼠疫疫情暴发及生物恐怖发生时对鼠疫菌进行基因分型检测，可快速鉴定鼠疫菌型别，并为溯源提供线索，对疫情的防控具有重要意义。随着鼠疫菌基因组多态性深入研究及鉴定溯源技术的发展，鼠疫菌基因分型检测已用于鼠疫的溯源研究[5-7]。然而，目前我国尚无鼠疫菌基因分型检测试剂评价用国家参考品，无法对此类试剂进行统一的质量评价。本研究建立了鼠疫菌基因分型检测试剂评价用国家参考品，为鼠疫菌基因分型检测试剂的评价和临床实验室质量评价提供了质控物质。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 菌种 2 株假结核耶尔森菌(CMCC53520、CMCC53521)、3 株小肠结肠炎耶尔森菌(CMCC52203、CMCC52211、CMCC52212)均由中国医学细菌保藏管理中心(CMCC)提供；鼠疫菌基因组鼠疫菌菌株编号/基因型分别为：45023/0.ANT、84012/1.IN、87017/1.ORI、J240003/2.ANT、47002/2.MED、71008/3.ANT、91044/0.PE4，基因组 DNA 由青海省地方病预防控制所提供。

    1.1.2 试剂 胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)购自美国 BD 公司；中国细菌浊度标准国家标准品由我院制备；细菌基因组 DNA 提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司；鼠疫菌分型检测试剂盒(荧光 PCR 熔解曲线法)由厦门大学研制 ......