彭宏威，刘南，张姗姗，邹聪，钱开宇

    循环游离 DNA(circulating free DNA，cfDNA)是在外周血中发现的游离于细胞外的 DNA[1]。1977 年，Leon 等[2]用放射免疫测定法发现肿瘤患者血清中 cfDNA 含量水平明显高于健康人群，现已证实它广泛存在于人体血液、尿液、脑脊液、胸腹水、卵泡液、唾液等各类体液中[3-4]。cfDNA 是核小体凋亡 DNA 在细胞内循环核酸酶的作用下天然断裂形成的平均长度为 180 ～ 200 bp 的小片段[5]，作为分子标志物具有获取简单、无创、信息量大等得天独厚的优点，在无创产前检测(non-invasive prenatal testing，NIPT)、肿瘤诊断及监测、器官移植监测、糖尿病、自身免疫性疾病等领域均具有大量的研究[6-7]。目前 cfDNA 的检测方法主要有PCR 和二代测序(next-generation sequencing，NGS)，其原理和优缺点各不相同，需结合研究目的及分析前变量来选择合适的方法。

    cfDNA 分析前各种因素均会影响其质量，这严重阻碍了 cfDNA 在众多领域内的临床推广应用。建立一套 cfDNA标准检测前处理流程(pre-analytical procedures，PAP)是cfDNA 检测实现临床广泛应用的关键。本文集中讨论cfDNA 研究现状及影响其质量的各种检测前变量，以期为cfDNA 建立标准 PAP 以及为临床检测的应用提供参考。

    1 cfDNA 研究现状

    cfDNA 主要类型有细胞核源性 DNA(nuclear cfDNA，ncfDNA)与线粒体源性 DNA(mitochondrial cfDNA，mtcfDNA)[8]。cfDNA 的产生机制目前不是完全清楚，现普遍认为是活细胞的主动释放或凋亡与坏死细胞的被动释放产生的[9]。人体 cfDNA 含量受肥胖、运动及肿瘤等多种因素影响[10-11]。在健康人外周血中 cfDNA 含量均值约为30 ng/ml[12]，几乎都来自凋亡或坏死细胞，肿瘤患者体内的cfDNA 则更多来源于肿瘤细胞及邻近非肿瘤细胞的凋亡[13]。

    目前 cfDNA 的检测主要有 PCR 和 NGS 两种方法，近年来基于这两种方法衍生出许多更加高效灵敏的检测方法。随着检测灵敏度和精确度的不断提高，PCR 技术现已发展为实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)、数字 PCR(digital PCR，dPCR)和微滴式数字 PCR(droplet digital PCR ......