黄 梅 杨丽娟 谢 丹

    (广州中医药大学第一附属医院乳腺科，广东省广州市机场路16号大院，510405)

    三苯氧胺(TAM)是乳腺癌内分泌治疗最重要的药物之一，应用三苯氧胺对雌激素受体阳性乳腺癌患者进行抗雌激素治疗，获益率约为60%，能减少复发率和提高生存率[1]。但是临床有40%左右雌激素受体阳性乳腺癌患者不能获益，有相当部分患者最初TAM治疗有效，但是最后因获得性的TAM耐药导致治疗失败。TAM耐药是目前乳腺癌研究的热点之一。本研究采用活血化瘀中药三七总皂苷和TAM联合应用于乳腺癌T47D细胞系，探索三七对TAM有无协同增效作用，从而为三七参与乳腺癌的内分泌治疗提供依据，为提高三苯氧胺临床疗效开辟新的思路。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 人乳腺癌T47D细胞株购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库;RPMI1640培养基和胰蛋白酶:美国Gibco公司;胎牛血清:美国Hyclone公司;0.25%胰酶:美国 Gibco公司;二甲基亚砜:美国Sigma公司;MTT:美国Sigma公司;实验用试剂(Cell cycle staining buffer):杭州联科生物技术有限公司;三苯氧胺系美国Sigma公司产品;三七总皂苷:四川杰象药物原料有限公司;全自动酶标仪:美国Bio.tad公司;流式细胞仪:Beckman公司。

    1.2 常用工作液的配制 1)磷酸缓冲液的配制:称取KCl 0.2g，KH2PO40.2g，NaCl 8.0g，Na2HPO4·12H20 2.89g，混合溶解于1000mL的双蒸水中，并调定 pH 7.2～7.4。2)细胞培养液配制:高糖DMEM+10%胎牛血清+200mL/40U胰岛素。3)三七母液配制:三七总皂苷162.5mg+16mL细胞培养液可以得到104μg/mL母液。4)三苯氧胺母液配制:取三苯氧胺10mg溶于17.742mL无水乙醇中即可得10-3mol/L母液。

    1.3 细胞培养 将T47D细胞培养于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培养基中 ......