庞春红 李澎涛 朱晓磊

    (1中日友好医院病理科，北京市朝阳区樱花东路2号，100029;2北京中医药大学;3世界中医药学会联合会)

    通过对缺血-再灌注损伤血清TNF-α、血清P-selectin、血清sICAM-1含量的测定及对脑组织ICAM-1的免疫组化定位分析，探讨在脑缺血-再灌注所致炎症级联反应损伤过程中TNF-α对其他细胞因子所发挥的调节作用，以及清开灵的作用特征。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组 健康雄性Wistar大鼠，体重(200±20)g(维通利华公司实验动物中心提供)。动物随机分为9组，每组12只，9组为正常对照组、缺血再灌注24h模型组(模型24h组)、缺血再灌注72h模型组(模型72h组)、缺血再灌注24h TNF-α抗体组(抗体24h组)、缺血再灌注72h TNF-α抗体组(抗体72h组)、缺血再灌注24h清开灵给药组(清开灵24h组)、缺血再灌注72h清开灵给药组(清开灵72h组)、缺血再灌注24h TNF-α抗体与清开灵共用组(抗体加清开灵24h组)、缺血再灌注72h TNF-α抗体与清开灵共用组(抗体加清开灵72h组)。

    1.2 动物模型制备 按照许沛虎[1]的方法，加以改良，经腹腔注射10%水合氯醛(按0.35mL/100g体重)麻醉，颈前术区脱毛、消毒。颈部正中切口长约3cm，逐层分离，暴露并分离双侧颈总动脉。注意勿损伤迷走神经。在双侧颈总动脉下各置一段5cm长的丝线，用血管钳钳夹丝线两端使两动脉同时夹闭，30min后同时松开丝线，使血液重新灌流，术区局部使用青霉素粉少许，逐层缝合切口。应用TNF-α抗体的各组，在松开丝线恢复再灌流的同时经大鼠舌下静脉注射TNF-α单克隆抗体溶液(用生理盐水稀释，10μg/100g体重)[2-3]。清开灵给药组分别于造模前1h、造模后4h及以后每12h按照0.3mL/100g体重腹腔注射清开灵注射液。为减轻对腹腔的刺激，用2倍体积的生理盐水进行稀释，因此，实际给药体积为0.9mL/100g体重。

    1.3 取材处理 造模后分别于24h和72h两个时间点取材。腹腔注射10%水合氯醛(按0.35mL/100g体重)麻醉后经腹主动脉取全血6mL。其中4mL室温静置1h后，1500r/min离心10min，分离血清，-80℃保存待测。其余2mL加适量肝素抗凝后3000r/min离心10min，分离血浆，-80℃保存待测。

    1.4 主要试剂 水合氯醛(北京化学试剂公司，批号:20030518);TNF-α单克隆抗体(R＆D Sestems ......