周 倩 姚广涛 金若敏 谢家骏

    (上海中医药大学药物安全评价研究中心，上海，201203)

    商陆皂苷甲致肾细胞毒性的研究

    周 倩 姚广涛 金若敏 谢家骏

    (上海中医药大学药物安全评价研究中心，上海，201203)

    目的：考察商陆皂苷甲Esculentoside A(EsA)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的毒性。方法：1)MTT法测细胞活力；2)检测细胞上清液LDH、细胞内SOD及MDA；3)采用倒置显微镜及电镜观察细胞形态学；4)采用Hoechst-PI染色及流式细胞仪观察细胞凋亡的情况。结果：1)EsA对肾细胞的活力有显著的抑制作用，其IC50为149.11μg·mL-1，且存在一定的时效和量效关系；2)EsA能升高肾细胞培养上清中的LDH，使肾细胞内SOD/MDA比值有所下降；3)EsA能使肾细胞及其超微结构发生变化，出现凋亡或坏死，有一定的量效关系。结论：大于100μg·mL-1浓度的商陆皂苷甲对HK-2细胞有一定的毒性，其毒性机制与细胞氧化应激、凋亡等相关。

    商陆皂苷甲；HK-2细胞；肾细胞毒性

    商陆始载于《神农本草经》，为商陆属植物商陆(Phytolacca acinosaRoxb.)和垂序商陆(Phytolacca americanaL.)的干燥根，为泻下逐水药，其性寒，味苦辛，有毒，归肺、肾、大肠经[1]。现代研究显示，商陆具有免疫调节及抗肿瘤、消炎抗菌、利尿等多种药理作用，过量服用商陆的不良反应有神经系统和消化系统[2-5]，课题组研究曾指出，商陆能对大鼠的肾脏产生一定的毒性[6]。本文选用主要成分之一商陆皂苷甲，探讨其对肾细胞的直接毒性。

    1 材料

    1.1 细胞株 HK-2细胞即人肾小管上皮细胞，由上海中科院细胞库提供。

    1.2 试剂及材料 商陆皂苷甲(上海融禾医药科技发展有限公司，纯度>98%，批号：120417)；DMEM/F12培养基(Gibco公司)；胎牛血清(Hyclone公司)；青霉素-链霉素抗体(Gibco公司)；胰蛋白酶(Sigma公司)；MTT、PI、Hoechst33342(Sigma公司)；LDH(日本世诺临床诊断制品株式会社)；SOD、MDA、超微量蛋白(南京建成生物研究所)；二甲基亚砜(国药集团化学试剂有限公司)。培养基配置：DMEM/F12+10%胎牛血清+1%双抗。

    1.3 仪器 BioTek全自动酶标仪；欧林巴斯BX51正置显微镜、IX70倒置系统显微镜；日立7080全自动血液生化仪 ......