郭志丽朱 妍，2肖红斌王 忠

    (1中国中医科学院，北京，100700；2陕西步长制药有限公司，西安，712000；3中国科学院大连化学物理研究所，大连，116023)

    丹红注射液调节大脑中动脉阻塞大鼠血清氨基酸代谢谱的实验研究

    郭志丽1朱 妍1，2肖红斌3王 忠1

    (1中国中医科学院，北京，100700；2陕西步长制药有限公司，西安，712000；3中国科学院大连化学物理研究所，大连，116023)

    目的：利用代谢组学手段检测大脑中动脉阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO)模型大鼠血清中氨基酸含量，微观上阐明氨基酸注射液的疗效以及部分作用机制。方法：采用邻苯二甲醛(O-Phthalaldehyde，OPA)柱前在线衍生反相高效液相色谱法，采用荧光检测，梯度洗脱，建立了血清中氨基酸代谢谱的相对定量分析方法，测定36例大鼠血清中的15种氨基酸含量。流动相A为10 mol/LNa2HP04-Na2B07缓冲液(pH＝7.95)，B为乙腈-甲醇-水(45∶45∶15，V/V/V)，线性梯度洗脱，流动相B在6 min内由5%增加至17.2%，6～35 min内由17.2%增加至52%。结果：1)该法在35 min之内分离出15种氨基酸；2)经主成分分析，3个组在空间上得到很好地分离，氨基酸代谢谱发生了一定的变化；3)利用SPSS方差分析，有6个氨基酸在分离各组有统计学意义。结论：丹红注射液通过部分调节MCAO摄动通路改善脑梗死大鼠血清部分氨基酸的代谢趋势。

    高效液相色谱；氨基酸代谢组学；脑梗死；丝氨酸代谢

    氨基酸作为代谢网络中重要的代谢物，与脑梗死存在相关性[1]。脑梗死的病理生理机制尚不清楚，应用代谢组学的科学性，通过数学建模用于研究药物靶标和数据挖掘很有意义[2]。氨基酸代谢系统分析，在生物学研究当中是一个主要范例，将帮助我们确定新的药物靶点反过来又会更深入了解脑梗死的产生机制，从而更好的指导药物发现[3]。本实验通过氨基酸类代谢谱的代谢组学法，建立了血清氨基酸代谢谱柱前在线衍生化HPLC-FLD方法，应用了代谢组学使用的超高效液相色谱结合模式识别方法的平台，用于研究代谢和疾病的相关性。

    1 实验部分

    1.1 样品采集与预处理

    1.1.1 造模方法 参照Longa等的线拴法，略做改进。用15%水合氯醛(4mL/kg，ip)麻醉大鼠。将麻醉后的大鼠仰卧位固定，消毒皮肤，铺无菌洞巾，近正中切口，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉 ......