姚东升 胡义扬 傅琪琳 顾宏图 徐 琳 王文静 彭景华 赵 瑜 冯 琴

    (上海中医药大学附属曙光医院，上海中医药大学肝病研究所，上海高校中医内科学E-研究院，肝肾疾病病证实验室，上海市中医临床重点实验室，上海，201203)

    柔肝固肠方改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性的机制研究

    姚东升 胡义扬 傅琪琳 顾宏图 徐 琳 王文静 彭景华 赵 瑜 冯 琴

    (上海中医药大学附属曙光医院，上海中医药大学肝病研究所，上海高校中医内科学E-研究院，肝肾疾病病证实验室，上海市中医临床重点实验室，上海，201203)

    目的：从肠道紧密连接及黏附连接角度探讨柔肝固肠方改善慢性酒精性肝损伤大鼠肠道通透性的作用机制。方法：Lieber-DeCarli酒精液体饲料饲养6周诱导大鼠慢性酒精性肝损伤模型。30只SD雄性大鼠，随机分无酒精液体饲料对照组(对照组，n=10)和酒精液体饲料造模组(n=20)，造模第4周将造模组大鼠随机分模型组(n=10)，柔肝固肠方组(n=10)，并开始灌胃给柔肝固肠方或蒸馏水直至6周末，取材前3.5 h各组以10 mg/ kg的内毒素(LPS)灌胃。取材后检测：1)血清AST、ALT活性变化；2)通过门脉血浆内毒素含量测定判断小肠通透性变化；3)小肠组织电镜超微结构观察；4)小肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白与mRNA表达变化；5)小肠黏附连接蛋白β-Catenin和E-Cadherin蛋白表达。结果：1)柔肝固肠方可显著降低模型大鼠显著升高的AST水平(P1 实验材料

    1.1 动物 SD雄性大鼠，SPF级，体重130～160 g，30只，合格证号SCKC-沪-2008-0016，购自上海必凯实验动物有限公司。特制笼具单笼饲养于上海中医药大学实验动物中心。特制Richter饲料瓶(负压饲料瓶)予大鼠自动饮用液体饲料。

    1.2 药物 柔肝固肠方由白芍、五味子、泽泻组成。五味子加70%乙醇提取2次，过滤，回收乙醇；泽泻、白芍分别水提，滤液冷藏备用，临用前将三种药混合配成悬浊液。给药时配制成10 mL/kg鼠重的灌胃液。中药购自上海华宇药业有限公司，上海中医药大学科技中心制备。

    1.3 试剂 血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase，ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase，AST)测定试剂盒购自南京建成生物制品研究所；内毒素检测试剂盒(货号21080309C/BU0209)购自美国ACC公司；ZO-1多克隆抗体(货号SC-10804)、E-cadherin(货号sc-7870) ......