万 谦 姚奏英 伍林涛 陆 华

    (1 成都中医药大学第二附属医院，成都，610041; 2 四川省计划生育研究所，成都，610041; 3 成都中医药大学临床医学院，成都，610075; 4 贵州省油菜研究所，贵阳，550008)

    齐墩果酸诱导多种小鼠胚胎干细胞向生殖细胞方向分化研究

    万 谦1，2姚奏英2，3伍林涛4陆 华1，2

    (1 成都中医药大学第二附属医院，成都，610041; 2 四川省计划生育研究所，成都，610041; 3 成都中医药大学临床医学院，成都，610075; 4 贵州省油菜研究所，贵阳，550008)

    目的：寻找一种能诱导多种胚胎干细胞向生殖细胞方向分化的化合物，并以常用的诱导物维甲酸(Retinoic Acid,RA)作为阳性参照物。方法：分别培养小鼠胚胎干细胞1B10、D3、R1/E，诱导它们形成拟胚体，让拟胚体贴壁生长，加入特定化合物诱导贴壁细胞分化，诱导72 h后，提取被诱导细胞的RNA，再合成cDNA，最后利用实时荧光定量PCR检测各被诱导细胞中与生殖分化相关的基因的表达水平的变化。结果：发现齐墩果酸(Oleanolic Acid，OA)显著上调了所有被研究的小鼠胚胎干细胞的生殖分化关键基因的表达水平，同时发现阳性参照物RA仅能诱导1B10、R1/E，而不能诱导D3向生殖细胞方向分化。结论：OA能诱导多种胚胎干细胞向生殖细胞方向分化，诱导能力方面具有比常用诱导物维甲酸更广泛的普遍性。

    齐墩果酸;小鼠胚胎干细胞;体外分化诱导物;生殖方向分化

    胚胎干细胞来源于胚胎在囊胚时期的囊胚中的内细胞团，被发现具有强大的分化能力，在体外能被特定的化合物或者蛋白质因子诱导分化为多种细胞，比如心肌细胞[1]、表皮细胞[2]、血管细胞[3]、角化细胞[4]、神经细胞[5]、生殖细胞[6]等等。目前，体外诱导系统被广泛地采用来研究胚胎干细胞的分化，现已有多种诱导物被发现，包括PDGF，BMP2，BMP4，Activin A，bFGF，Wnt3a，RA，FGF，DMSO，and TGF-b1[7-9]。

    近年来，新的诱导物或者诱导方法频繁被发现，使得胚胎干细胞的体外诱导系统不断被充实，说明体外诱导系统有广泛的空间可以被挖掘。很多中药单体被发现具有令人感兴趣的功能，所以，我们希望从中药单体中寻找新的可诱导胚胎干细胞向生殖细胞分化的物质。另一方面，目前被研究的胚胎干细胞有多种细胞株，拿小鼠胚胎干细胞来说，就有1B10、D3、R1/E、CE3、J1等，这些细胞株虽然都来自于囊胚的内细胞团 ......