基于ITS序列位点特异性PCR鉴别桃仁与苦杏仁(3)
243DNA聚合酶的考察对Ex Taq DNA聚合酶,2×Taq PCR StarMix,2×EasyTaq PCR SuperMix 3种聚合酶进行考察。结果如图6。采用不同聚合酶的PCR反应,伪品均无条带,而正品均有333 bp特异性扩增条带,说明特异性引物可用多种酶进行实验,无单一局限性。
244PCR仪对实验结果重复性的影响
选用2种不同型号的PCR仪(Eppendorf AG 22331、Applied Biosystems Veriti)进行考察,结果桃仁均出现整齐、明亮清晰的条带,苦杏仁均无条带出现(图7),表明此方法稳定性好,重复性高,PCR仪对其结果无明显影响。
3讨论
由于桃仁品种繁杂,形态变异大,且与苦杏仁形态相似,尤其是山桃仁在形态上与杏仁更加难以区分,故传统鉴别在实际应用中很难将两者准确区别。位点特异性引物PCR具有操作简单、成本低、重复性好等优点,使用特异性引物可以极大降低PCR的假阳性率,保证鉴定结果的准确性[4],特别是近年来快速PCR技术迅速发展,使得中药材分子鉴定在现场快速鉴定上的应用成为了可能[56] ......
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