1.2.5 Western-blot法检测eNOS磷酸化和自噬蛋白表达 采用蛋白裂解液提取胞质蛋白组织于4 ℃，3 000 r/min离心4 min，收集上清，进行Western Blot检测。BCA法测定蛋白含量并定浓度至0.5 mg protein/mL，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，采用相关抗体进行磷酸化和非磷酸化相关蛋白表达检测。增强化学发光(Enhanced Chemiluminescence，ECL)显色。底片曝光。

    1.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 收集细胞，每样品配制成5×105/mL悬液，离心去上清，加入195 μL AnnexinV-FITC结合液重悬细胞，加入10 μL PI染色液和5 μL FITC-conjugated Annexin-V进行双重染色20 min。然后在Epic XL流式细胞仪上在488 nm处检测，应用Expo32软件分析数据。

    1.3 统计学方法 所有OD值都应减除空白值后再行计算。以标准品1 000、500、250、100、50、25 pg/mL之OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线。将浓度作为X轴(对数轴)，OD值作为Y轴(线性轴)。曲线应为一光滑曲线。根据样品OD值在该曲线图上查出相应细胞因子含量。实验结果以平均值±标准差表示 ......