羚羊角塞特异性PCR鉴别方法研究(2)
1.2 试剂 不同特性Taq DNA聚合酶:r Taq(Takara公司生产)、Trans Taq(TransGen公司生产)、Vazyme Taq plus(Vazyme公司生产),中度保真的Ex Taq(Takara公司生产)、HS Taq(Takara公司生产),高度保真的SpeedSTAR HS Taq聚合酶(Takara公司生产)进行试验;琼脂糖(Promega公司生产);溴化乙啶(Fluka公司生产);DL2000 DNA Marker(Takara公司生产);10000×SYBR(Invitrogen公司生产);其他试剂均为国产分析纯。1.3 分析样品 采集来自于不同产地的羚羊角塞正品及常见混伪品共52份材料进行特异性PCR鉴别研究。样品采自安徽亳州、广西玉林、河北安国等药材市场,凭证标本保存于中国中医科学院中药资源中心。见表1。
2 方法与结果
2.1 引物设计
2.1.1 序列比对 从NCBI数据库(National Center for Biotechnology Information)中下载羚羊角塞的基原物种赛加羚羊(KF73209.1、KC679014.1、KC679010.1)及其可能的混伪品基原物种绵羊(KT750038.1)、山羊(JN245994.1)、普氏原羚(KC679051.1)、藏原羚(KC679009.1)、藏羚羊(HQ269460.1)、蒙原羚(KC679036.1)、鹅喉羚(KC679026.1)的COI序列经Clustal W程序进行多重序列比对 ......
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