高效液相色谱—蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷的含量(1)
摘要 目的：评价高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)黄七胶囊中黄芪甲苷的含量测定。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器；柱压11.2～12.3 MPa；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。理论塔板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000；峰拖尾因子为1.02。结果：HPLC-ELSD法精密度、重复性、稳定性、回收率良好。黄芪甲苷对照品进样量在1.0528～10.528 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9，n=7)。结论：高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄七胶囊中黄芪甲苷含量是可行的。
关键词 黄七胶囊；高效液相色谱-蒸发光散射检测器法；黄芪甲苷
Abstract Objective：To evaluate contents of astragaloside in Huangqi Capsules measured by HPLC-ELSD. Methods：The octadecyl silane bonding silica gel was the filler， with acetonitrile-water (32∶68) as mobile phase， and the detector was ELSD with the column pressure of 11.2～12.3 MPa and the flow rate of 1.0 mL/min. Column temperature： indoor temperature. Theoretical plate number was calculated by puerarin peak which should not be less than 4 000； Trailing factor was 1.02. Results：The method of HPLC-ELSD had good accuracy， repeatability， stability and recovery rate. A good linearity relationship of the sample size of asreagaloside comparison products in the range of 1.0528-10.528 μg (r=0.999 9， n=7). Conclusion：Contents of astragaloside in Huangqi Capsules measured by HPLC-ELSD is feasible.
Key Words Huangqi Capsules； HPLC-ELSD； Astragaloside
中图分类号：R284文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.02.053
中风又名“卒中”，其基本病机为阴阳失调、气血逆乱、上犯于脑，导致脑脉痹阻或血溢脑脉之外，临床以卒然昏仆、不省人事、半身不遂、口舌歪斜、语言不利、偏身麻木为主症的一种疾病[1]。因本病起病急剧，变化迅速，与自然界善行而数变之风邪特性相似，故古人以此类比，名为中风[2]。中风是中医学中的4大顽疾之一，具有发病率高、复发率高、致残率高、病死率高的特点，严重危害人民健康的疾病[3]。中风初发时以风证为主；发病1～2周时，以痰湿证、血瘀证为多；恢复期以血瘀证、气虚证为多[4]。现代血液流变学研究表明，中风患者血液存在着“浓”(红细胞比容增高)、“黏”(全血黏度比、血浆黏度比和纤维蛋白原增高)、“聚”(紅细胞时间性泳时间长)的情况[5]。故益气活血法为中风、特别是中风恢复期的重要治疗法则。
黄七胶囊是在黄七汤的基础上研制而成，由黄芪、土鳖虫、三七、葛根4味药材组成，具有益气活血，化瘀通络之功效。用于气虚血瘀，脉络瘀阻所致的中风恢复期，对半身不遂，肢体麻木，口眼歪斜，言语不清或不语，感觉减退或消失治疗效果良好[6]。方中君药黄芪是一味常用中药，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效。临床用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泻脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、痈疽难溃、久溃不敛、血虚痿黄、内热消渴，慢性肾炎蛋白尿、糖尿病等[7]。现代研究表明，黄芪皂苷具有减少脑缺血再灌注(I/R)后神经元凋亡[8-10]、降低Ca+超载[11-12]、减少活性氧的损伤[13]、减轻炎性反应[14]、促进修复[15]等作用，在中风恢复期的抗细胞损伤和损伤后修复中发挥重要作用。在新药研制过程中，我们对黄七胶囊中君药黄芪的有效成分—黄芪甲苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)含量测定进行方法学研究，为有效控制黄七胶囊的质量奠定基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器 P-3000型高效液相色谱仪；ELSD-UM3000型蒸发光散射检测器；Trisep-2003色谱工作站，7725i进样器。
1.2 试药 10批样品由杨凌无为制药集团公司自制，黄芪甲苷对照品：中国药品生物制品检定所提供，批号：110781-200613，供含量测定用。3批研究用中试样品，批号：20100602、20100605、20100608，由该公司胶囊剂车间生产，乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
2.1.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱压11.2～12.3 MPa；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。理论塔板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000；峰拖尾因子为1.02。
2.1.2 流动相的选择比例 将乙腈-水溶液的比例分别选为(28∶72)(32∶68)(36∶64)(40∶60)，按正文方法用对照品溶液精密吸取20 μL，作图，结果表明，乙腈-水溶液(32∶68)为流动相的分离效果最佳。见表1。, 百拇医药(杜鹏 顿宝生 杨新杰 彭修娟)
关键词 黄七胶囊；高效液相色谱-蒸发光散射检测器法；黄芪甲苷
Abstract Objective：To evaluate contents of astragaloside in Huangqi Capsules measured by HPLC-ELSD. Methods：The octadecyl silane bonding silica gel was the filler， with acetonitrile-water (32∶68) as mobile phase， and the detector was ELSD with the column pressure of 11.2～12.3 MPa and the flow rate of 1.0 mL/min. Column temperature： indoor temperature. Theoretical plate number was calculated by puerarin peak which should not be less than 4 000； Trailing factor was 1.02. Results：The method of HPLC-ELSD had good accuracy， repeatability， stability and recovery rate. A good linearity relationship of the sample size of asreagaloside comparison products in the range of 1.0528-10.528 μg (r=0.999 9， n=7). Conclusion：Contents of astragaloside in Huangqi Capsules measured by HPLC-ELSD is feasible.
Key Words Huangqi Capsules； HPLC-ELSD； Astragaloside
中图分类号：R284文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.02.053
中风又名“卒中”，其基本病机为阴阳失调、气血逆乱、上犯于脑，导致脑脉痹阻或血溢脑脉之外，临床以卒然昏仆、不省人事、半身不遂、口舌歪斜、语言不利、偏身麻木为主症的一种疾病[1]。因本病起病急剧，变化迅速，与自然界善行而数变之风邪特性相似，故古人以此类比，名为中风[2]。中风是中医学中的4大顽疾之一，具有发病率高、复发率高、致残率高、病死率高的特点，严重危害人民健康的疾病[3]。中风初发时以风证为主；发病1～2周时，以痰湿证、血瘀证为多；恢复期以血瘀证、气虚证为多[4]。现代血液流变学研究表明，中风患者血液存在着“浓”(红细胞比容增高)、“黏”(全血黏度比、血浆黏度比和纤维蛋白原增高)、“聚”(紅细胞时间性泳时间长)的情况[5]。故益气活血法为中风、特别是中风恢复期的重要治疗法则。
黄七胶囊是在黄七汤的基础上研制而成，由黄芪、土鳖虫、三七、葛根4味药材组成，具有益气活血，化瘀通络之功效。用于气虚血瘀，脉络瘀阻所致的中风恢复期，对半身不遂，肢体麻木，口眼歪斜，言语不清或不语，感觉减退或消失治疗效果良好[6]。方中君药黄芪是一味常用中药，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效。临床用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泻脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、痈疽难溃、久溃不敛、血虚痿黄、内热消渴，慢性肾炎蛋白尿、糖尿病等[7]。现代研究表明，黄芪皂苷具有减少脑缺血再灌注(I/R)后神经元凋亡[8-10]、降低Ca+超载[11-12]、减少活性氧的损伤[13]、减轻炎性反应[14]、促进修复[15]等作用，在中风恢复期的抗细胞损伤和损伤后修复中发挥重要作用。在新药研制过程中，我们对黄七胶囊中君药黄芪的有效成分—黄芪甲苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)含量测定进行方法学研究，为有效控制黄七胶囊的质量奠定基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器 P-3000型高效液相色谱仪；ELSD-UM3000型蒸发光散射检测器；Trisep-2003色谱工作站，7725i进样器。
1.2 试药 10批样品由杨凌无为制药集团公司自制，黄芪甲苷对照品：中国药品生物制品检定所提供，批号：110781-200613，供含量测定用。3批研究用中试样品，批号：20100602、20100605、20100608，由该公司胶囊剂车间生产，乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
2.1.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱压11.2～12.3 MPa；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。理论塔板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000；峰拖尾因子为1.02。
2.1.2 流动相的选择比例 将乙腈-水溶液的比例分别选为(28∶72)(32∶68)(36∶64)(40∶60)，按正文方法用对照品溶液精密吸取20 μL，作图，结果表明，乙腈-水溶液(32∶68)为流动相的分离效果最佳。见表1。, 百拇医药(杜鹏 顿宝生 杨新杰 彭修娟)
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