针刺曲池、足三里对脑缺血大鼠行为学、超微结构及TGFβ1蛋白的影响(3)
1234蛋白印迹法测定蛋白水平变化从各组大鼠中随机选取3只脱颈处死后，剪取相对应缺血半暗带组织100 mg置于离心管中，根据不同组织重量家里相应的裂解液，放置于4 ℃进行匀浆处理后设置15 000 r/min转速进行离心，用移液枪抽吸上清液，使用BCA试剂盒对25 μL上清液进行蛋白浓度测定，同时计算上样量。完成上述步骤后以4：1的比例往上清液中樣缓冲液，将混合液置于100 ℃金属浴锅中进行蛋白变性7 min。根据碧云天BCA试剂盒说明书配制胶体(6%浓缩胶，12%分离胶)，将事先计算好每组上样量将标本加入胶体中60 V进行电145 min后将胶体上的蛋白转印至PVDF膜中，再用丽春红进行PVDF膜染色观察蛋白是否顺利转印至PVDF膜中。用TBST将脱脂奶粉配制成5%浓度，将转印后目的蛋白的PVDF膜进行封闭2 h，随后用PBS冲洗，置于显影仪器中，滴入ECL显影液，反应60 s后进行条带扫描，得出OD值。13统计学方法采用SPSS 200统计软件进行研究数据的分析。所得数据都用(均数±标准差)(±s)表示，组间比较采用两样本t检验或两样本秩和检验；组内比较采用配对t检验或配对秩和检验，以P<005为差异有统计学意义 ......
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