桃红芪术软肝煎对肝纤维化大鼠病理及TGFβ/Smad信号通路的影响(3)
1.5.4E-Cadherin、Vimentin、转化生长因子(TGF)-β1、Smad2的mRNA表达检测采用RT-PCR方法检测。1)RNA制备：按Trizol试剂盒说明书步骤提取RNA，测A值(260nm，280nm)。其余样品-20℃冻存或立即反转录。2)RNA反转录：使用快速反转录试剂盒(FastQuantRTKit)合成第一链cDNA，得到的cDNA可用于后续实验，或低温保存；3)Real-timePCR扩增：反应体系20μL/管，2×SyBrGreenMix10μL，上下游引物各1μL(10μmol/L)，DEPCH2O7μL，cDNA1μL。引物序列如表1。反应条件：95℃5min；95℃30s，55℃30s，72℃35s，40个循环；72℃延伸8min。根据实时PCR的原始检测结果，按照相对定量计算公式计算出各样品的目的基因相对定量结果。2-⊿⊿Ct计算方法：⊿⊿Ct=实验组(Ct目的基因-Ct管家基因)-对照组(Ct目的基因-Ct管家基因)。1.6统计学方法采用SPSS18.0统计软件进行数据分析，组间比较使用单因素方差分析，先进行方差齐性检验，方差齐使用LSD方法进行组间的两两比较；方差不齐先用Welch方法校正，然后再用DunnettT3方法进行各组间比较 ......
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