1.2.3.4 采用Real-time PCR法检测cDNA样本中α-SMA基因相对含量 大鼠肝组织α-SMA的表达采用Real-time PCR法。将大鼠肝脏组织均质化、匀浆并离心，提取上清液，之后相分离上清液，抽取肝组织水相中的总RNA，按试剂盒说明操作，然后以cDNA为模板进行PCR扩增。引物序列：α-SMA上游引物5′-CGGGAGAAAATGACCCAGAT-3′，下游引物5′-CCAGAGTCCAGCACAATACCA-3′；内参β-actin上游引物5′-CGTAAAGACCTCTATGCCAACA-3′，下游引物5′-AGCCACCAATCCACACAGAG-3′；在PCR管中加入total RNA，Random Primer p(dN)6，之后冰浴，离心加入下列试剂，37 ℃温浴5 min、42 ℃温浴60 min、70 ℃温浴10 min。终止反应，最后将上述溶液-20 ℃保存。完成上述步骤后，把加好样品的96孔板放在ABI Stepone plus型荧光定量PCR仪中进行反应。收集数据，采用2-△△Ct法，通过Ct值对样本基因表达量的进行计算。

    1.3 統计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行分析，计数资料用均数±标准差(±s)表示，各组实验结果的统计数据符合正态分布 ......