牛蒡子苷元对体外C6胶质瘤细胞的抑制效果和凋亡机制(2)
1.2.2 CCK-8法检测细胞增殖抑制率 各组加入相应浓度的药液100 μL,分别于给药48 h后弃去药液,加入含10% CCK-8的培养基100 μL,置于培养箱中孵育2 h后,于450 nm波长处测定其A值,计算药物对肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。1.2.3 细胞周期分布与凋亡率检测 用流式细胞仪检测。取对数生长期的细胞,消化计数,调整细胞密度5×104/mL,每孔2 mL接种于6孔板,培养箱中常规培养48 h弃去原培养液。按分组予以不同处理因素:空白组、牛蒡子苷元组(1.25 μmol/L)、牛蒡子苷元组(10 μmol/L)、牛蒡子苷元组(40 μmol/L)、顺铂组(20 μmol/L),每组5个复孔,每孔药液2 mL药物作用48 h后,用不含EDTA的胰酶消化细胞,然后加入完全培养液终止消化,收集细胞,2 000 r/min×5 min离心,PBS洗两遍,离心后弃上清液,按照凋亡检测试剂盒说明书处理细胞,即每孔加入500 μL Binding Buffer重悬细胞 ......
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