1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株 NRK-49F大鼠肾脏成纤维细胞株，购自上海中科院细胞中心。大黄素(含量>98%)，溶解于二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide，DMSO)后制成混悬液。将NRK-49F细胞置于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，在含有5%CO2及饱和湿度的37 ℃恒温培养箱中连续培养。细胞隔天换液，每2～3 d传代1次。待细胞生长培养至60%～70%，胰酶消化并传代，取对数生长期细胞用于实验。

    1.1.2 试剂与仪器 大黄素(Sigma，E7881);TGF-β1人重组蛋白(美国Peprotech公司)、DMEM培养基、双抗(美国Hyclone公司);0.25%胰酶(美国Thermo Scientific公司);二甲基亚砜(DMSO，上海生工有限公司);Fbs10099-141胎牛血清(美国Gibco公司);BCA蛋白定量试剂盒、RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、PMSF、山羊抗兔二抗(威奥生物技术有限公司);PVDF膜(美国Millipore公司 ......