穴位按摩对急性脑缺血再灌注损伤模型鼠认知及Notch通路的影响干预组(3)
透射电镜观察海马组织超微结构:利用透射电镜观察各组大鼠海马组织的超微结构,利用水合氯醛充分麻醉后夹闭腹主动脉切口近心端,从右心耳灌注生理盐水100 mL及电镜灌流液100 mL后于冰上迅速取海马组织浸泡于电镜固定液,然后放入4 ℃冰箱中保存48 h,随后用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)进行漂洗,在30%乙醇5 min→50%乙醇10 min→70%乙醇10 min进行脱水,并在70%乙醇+铀于4 ℃冰箱过夜。再将标本置于纯丙酮+包埋剂(2:1)中浸透后环氧树脂包埋,手工修块,用徕卡切片机切成厚度为0.5 μm的半薄切片定位海马,随后再用超薄切片机切成90 nm薄片,后进行醋酸双氧铀(20 min)+柠檬酸铅(10 min)双重染色后利用透射电子显微镜H-7650拍摄观察超薄切片的超微结构。Western blotting检测Notch1、NICD蛋白水平变化:干预14 d后各组随机抓取3只大鼠进行充分麻醉后断头取左侧大脑皮质,将样本置于含1%PMSF的蛋白裂解液中,然后将组织放置冰里匀浆,放入冰中充分裂解,用BCA试剂盒进行蛋白定量并计算上样量,随后进行蛋白SDS-PAGE电泳,将目的蛋白转膜至聚偏二氟乙烯膜(PVDF) ......
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