中药淫羊藿苷对TDP43介导的骨关节炎软骨细胞病变的作用机制(3)
1.2.2 干预方法 1)荧光定量PCR检测：所有人软骨细胞培养7 d后采用Trizol提取总RNA，并通过逆转录获取cDNA，反应体系为20 μL，包括20～50 ng的cDNA，0.2 μmol/L各引物以及10 μLGoTaq qPCR Master mix。反应条件为95 ℃2 min，55 ℃30 s，72 ℃30 s，40个循环。采用Mx3005PTM Detection Systenm仪器进行检测。其中TDP-43引物如下，正义链：5，-CGGCTAGCGGGAAAAGTAA-3，反义链：5，-GAGCCGGACACCTCTCATAC-3，;Ⅰ型胶原α1引物如下，正义链：5，-GGCAACCT-CAAGAAGTCCC-3，反义链：5，-GTGCAGCCATCCACAAGC-3。目的基因每个样本重复检测3次，以2-△△Ct进行表示。2)中药淫羊藿苷干预：取TDP-43慢病毒转染完成的人软骨细胞至6孔板中，放置于DMEM/高糖中培养。将其随机分成3组，分别加入不同浓度的淫羊藿苷进行干预，其中低浓度组、中浓度组、高浓度组加入淫羊藿苷浓度分别为10 ng/mL、20 ng/mL、30 ng/mL。1.2.3 检测指标与方法 比较3组人软骨细胞中靶基因TDP-43与Ⅰ型胶原蛋白α1表达情况，TDP-43慢病毒转染的人软骨细胞加入中药淫羊藿苷前后细胞凋亡情况 ......
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