胆木化学成分对HUVEC细胞活性氧和通透性的影响(3)
1.2.4 以DCFH-DA试剂盒检测胆木化学成分对LPS诱导ROS的抑制作用 参照文献[14],采用DCFH-DA试剂盒法评价不同化合物对HUVEC细胞ROS的影响。将HUVEC接种至6孔板,30×104/2 mL/孔,分别做3复孔。血清饥饿培养48 h(0.2%FBS)。LPS(10 μg/mL)与样品共同刺激24 h后,用PBS洗涤细胞2次,并与DCFH-DA(参照说明书用PBS稀释至10 μmol/L)于37 ℃避光放置30 min。洗涤细胞,于倒置荧光显微镜下观察细胞(激发波长488 nm,发射波长:530 nm),拍摄图像并使用ipwin 32软件进行荧光半定量。1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析,以均数±标准误(±s)表示。组间比较采用单因素方差分析。其中通透性实验数据采用Dunnett′s检验方法进一步比较分析各组与对照组的差异;CCK-8和活性氧实验数据采用Boferroni检验方法进一步多重比较分析 ......
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