2.2 cDNA全长克隆 以提取的总RNA为模板，通过PrimeScriptTM II 1st strand cDNA试剂盒反转录得到cDNA。根据丹参基因组数据，选取F3′5′H基因的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)区域，设计基因全长扩增引物：SmF3′5′H-F/R，引物序列见表1。以cDNA为模板配制PCR反应体系，加入1 μL cDNA，0.1 μL Pyrobest DNA聚合酶，2.5 μL 10×Buffer和特异性基因全长扩增引物SmF3′5′H-F/R各0.1 μL，补充ddH2O至25 μL。设置PCR反应条件为：预变性95 ℃ 30 s;变性94 ℃ 30 s，退火56 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 2 min，30个循环;72 ℃ 10 min;10 ℃保温。将全部PCR产物通过凝胶电泳分离，将回收产物按照pEASY-Blunt Zero试剂盒提供的方法连接pEASY載体。取1 μL pEASY载体与4 μL回收产物混合 ......