2.8 丹参F3′5′H表达分析 取液体培养1个月的只转化了空载体的对照株系(PK)和过表达株系(OE)毛状根，以及采集的丹参根、茎、叶、花器官，分别提取总RNA，再将这些RNA反转录为cDNA。挑选SmF3′5′H基因特异性片段设计实时定量PCR(qRT-PCR)引物：SmF3′5′H-qF/R，引物序列见表1。以丹参SmACTIN(HM231319.1)作为内参基因，制备qRT-PCR体系：2×SYBR Premix Ex Taq II 2.5 μL，cDNA模板1 μL，引物各1 μL，RNase-free ddH2O 4.5 μL。qPCR反应条件为95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，40个循环。65～95 ℃时做熔解曲线，收集Ct值，以2-△△Ct方法[15]计算不同样品间该基因相对表达量。

    2.9 结果

    2.9.1 SmF3′5′H全长克隆及序列比对 以紫花丹参99-3株系的cDNA和基因组DNA为模板，分别克隆得到了SmF3′5′H的cDNA的完整ORF和基因组序列。该基因cDNA全长为1 551 bp，编码516个氨基酸;该基因的基因组序列全长1 634 bp，经与cDNA序列比对分析发现，該基因的基因组序列(gDNA)中含有一段长为83 bp的内含子序列。见图2。在采集的42株丹参样品中，17株为白花丹参，标记为B(白花);25株为紫花丹参，标记为Z(紫花)，其中3株为浅紫花丹参 ......