身痛逐瘀汤对静水压下人髓核细胞凋亡和基质相关蛋白表达的影响(3)
1.2.3.2 采用流式法测定各组NP细胞的凋亡率 1)NP细胞离心后用胰酶(不含EDTA)消化，用PBS洗涤后置入500 μL的结合缓冲液(Binding Buffer)悬浮细胞，后用5 μL膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)混匀后，用5 μL荧光染料碘化丙啶(PI，Propidium Iodide)反应5～15 min，在1 h内，进行观察和检测。正常情况下活性高的细胞不被膜联蛋白V-FITC和荧光染料碘化丙啶染色;凋亡早期的细胞仅被膜联蛋白V-FITC染色，荧光染料碘化丙啶染色呈阴性;坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被膜联蛋白V-FITC和荧光染料碘化丙啶染色。1.2.3.3 采用Western Blot法检测SOX9、Collagen Ⅱ的表达 1)组织蛋白提取方法：将离心后的NP细胞置于RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，在4 ℃条件下放于离心机12 000 r/min(离心半径10 cm)下作用10 min ......
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