栀子叶片愈伤组织诱导优化研究(1)
摘要 目的：对栀子(Gardenia jasminoides Ellis)叶片愈伤组织诱导进行优化研究。方法：通过以叶片为外植体，MS和WPM为基本培养基，添加不同激素组合(6-BA、NAA和IBA)进行愈伤组织诱导研究。结果：栀子叶片在WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L以及6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1(或0.5)mg/L中均有100%的诱导率;在MS培养基上，MS+6-BA 1.0(或1.5)mg/L+NAA 0.5 mg/L的诱导率最好，分别为70%和74%。栀子叶片愈伤组织在再分化培养基上均未诱导出丛生芽。结论：WPM培养基比MS培养基更易诱导栀子叶片愈伤组织，且栀子愈伤组织的再分化较困难。
关键词 栀子;叶片;愈伤组织诱导;MS培养基;WPM培养基;6-BA;NAA;IBA
Abstract Objective：To study the optimization of leaf callus induction in Gardenia jasminoides Ellis.Methods：The callus induction was studied using leaves as explant，MS and WPM as basic medium adding different hormone combinations(6-BA，NAA and IBA).Results：Gardenia leaves had a 100% of callus induction rate in WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L or 6-BA1.0 mg/L+NAA 0.1(or 0.5)mg/L，while 70% and 74% were the best induction rates in MS+6-BA 1.0(or 1.5)mg/L+NAA 0.5 mg/L，respectively.The leaf callus of Gardenia did not induce cluster buds in the redifferentiation medium.Conclusion：Compared with MS medium，the callus was easy to be induced in WPM medium，and the redifferentiation of Gardenia callus was difficult.
Keywords Gardenia jasminoides Ellis; leaves; Callus induction; MS medium; WPM medium; 6-BA; NAA; IBA
梔子(Gardenia jasminoides Ellis)，为茜草科栀子属多年生常绿灌木，生于丘陵山谷或山坡灌丛中，分布于江苏、安徽、浙江、江西、福建和贵州等地[1]。其干燥成熟果实是传统中药，属原卫生部颁布的第一批药食两用资源，性味苦寒，有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、消肿止痛等功效，主要活性物质有环烯醚萜类(栀子苷)、二萜色素类(西红花苷和西红花酸)、有机酸类(绿原酸和熊果酸)和油脂类等[2]。其中，从栀子成熟果实提取的黄色素着色力强、安全性高、成本较低，且有一定的保健和营养价值，可广泛应用于食品、饮料、医药和化妆品等领域，是国际上允许生产和使用的天然食用黄色素[3-4]。此外，栀子花朵美丽、花香沁人心脾，是园林塑景以及发展休闲和观光农业的优势物种[5]。栀子集药用、食用及观赏价值于一体，应用前景十分广阔。建立栀子组培体系，对栀子优良品种选育及保存具有重要意义。
在麻疯树的组织培养研究中，赵雪惠等[6]以幼胚为外植体，去除胚乳，接种于4种(MS、LM、WPM和N6)未添加任何植物激素的培养基上进行培养，在MS与WPM培养基上能够大量诱导出愈伤组织，并且WPM培养基上分化出不定芽数量最多。以WPM为基本培养基，添加激素组合6-BA与NAA如悬铃木[7]和青钱柳[8]，或添加激素组合6-BA与IBA如大果榉[9]和胡杨[10]，均可诱导愈伤组织、丛生芽，最后得到再生植株。在栀子的组织培养研究中，多以MS为基本培养基，筛选栀子组织培养最适激素配比[11-12]，未见采用WPM培养基的研究。因此，本研究拟以MS及木本植物培养基WPM为基本培养基，添加激素6-BA、NAA和IBA，对栀子叶片愈伤组织诱导、愈伤组织再分化进行研究，进一步完善栀子组织培养体系，为栀子优良品种选育和保存、栀子功能基因组研究奠定基础。
1 材料
栀子取自重庆市药物种植研究所培育的优良品种ZZ1-9的扦插盆栽苗。选取生长状态良好，无黄叶无病态的栀子幼嫩茎尖为材料。
所需植物激素为6-苄氨基嘌呤(6-BA，华绿源科技有限公司，北京)，萘乙酸(NAA，华绿源科技有限公司，北京)，吲哚丁酸(IBA，华绿源科技有限公司，北京)，所需基本培养基为MS(Murashige & Skoog with Vitamins，Caisson labs，美国，批号：0619003)和WPM(McCown Woody Plant medium with vitamins，COOLABER，中国，批号：PM28151421)培养基。
2 方法
2.1 获取无菌外植体 选取栀子幼嫩茎尖2～3 cm为外植体，自来水冲洗干净后在超净工作台中进行后续灭菌操作。先用75%酒精浸泡30 s，无菌水洗3次，再用2%次氯酸钠消毒10～15 min，无菌水洗5～6次。将消过毒的外植体放在无菌滤纸上吸干表面水分，接种到不添加激素的MS培养基上启动培养，后转入无菌苗培养基上继续培养，无菌苗培养基[13]为MS+6-BA 1 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L，pH=5.8。, 百拇医药(田亚 徐志超 胡开治)
关键词 栀子;叶片;愈伤组织诱导;MS培养基;WPM培养基;6-BA;NAA;IBA
Abstract Objective：To study the optimization of leaf callus induction in Gardenia jasminoides Ellis.Methods：The callus induction was studied using leaves as explant，MS and WPM as basic medium adding different hormone combinations(6-BA，NAA and IBA).Results：Gardenia leaves had a 100% of callus induction rate in WPM+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L or 6-BA1.0 mg/L+NAA 0.1(or 0.5)mg/L，while 70% and 74% were the best induction rates in MS+6-BA 1.0(or 1.5)mg/L+NAA 0.5 mg/L，respectively.The leaf callus of Gardenia did not induce cluster buds in the redifferentiation medium.Conclusion：Compared with MS medium，the callus was easy to be induced in WPM medium，and the redifferentiation of Gardenia callus was difficult.
Keywords Gardenia jasminoides Ellis; leaves; Callus induction; MS medium; WPM medium; 6-BA; NAA; IBA
梔子(Gardenia jasminoides Ellis)，为茜草科栀子属多年生常绿灌木，生于丘陵山谷或山坡灌丛中，分布于江苏、安徽、浙江、江西、福建和贵州等地[1]。其干燥成熟果实是传统中药，属原卫生部颁布的第一批药食两用资源，性味苦寒，有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒、消肿止痛等功效，主要活性物质有环烯醚萜类(栀子苷)、二萜色素类(西红花苷和西红花酸)、有机酸类(绿原酸和熊果酸)和油脂类等[2]。其中，从栀子成熟果实提取的黄色素着色力强、安全性高、成本较低，且有一定的保健和营养价值，可广泛应用于食品、饮料、医药和化妆品等领域，是国际上允许生产和使用的天然食用黄色素[3-4]。此外，栀子花朵美丽、花香沁人心脾，是园林塑景以及发展休闲和观光农业的优势物种[5]。栀子集药用、食用及观赏价值于一体，应用前景十分广阔。建立栀子组培体系，对栀子优良品种选育及保存具有重要意义。
在麻疯树的组织培养研究中，赵雪惠等[6]以幼胚为外植体，去除胚乳，接种于4种(MS、LM、WPM和N6)未添加任何植物激素的培养基上进行培养，在MS与WPM培养基上能够大量诱导出愈伤组织，并且WPM培养基上分化出不定芽数量最多。以WPM为基本培养基，添加激素组合6-BA与NAA如悬铃木[7]和青钱柳[8]，或添加激素组合6-BA与IBA如大果榉[9]和胡杨[10]，均可诱导愈伤组织、丛生芽，最后得到再生植株。在栀子的组织培养研究中，多以MS为基本培养基，筛选栀子组织培养最适激素配比[11-12]，未见采用WPM培养基的研究。因此，本研究拟以MS及木本植物培养基WPM为基本培养基，添加激素6-BA、NAA和IBA，对栀子叶片愈伤组织诱导、愈伤组织再分化进行研究，进一步完善栀子组织培养体系，为栀子优良品种选育和保存、栀子功能基因组研究奠定基础。
1 材料
栀子取自重庆市药物种植研究所培育的优良品种ZZ1-9的扦插盆栽苗。选取生长状态良好，无黄叶无病态的栀子幼嫩茎尖为材料。
所需植物激素为6-苄氨基嘌呤(6-BA，华绿源科技有限公司，北京)，萘乙酸(NAA，华绿源科技有限公司，北京)，吲哚丁酸(IBA，华绿源科技有限公司，北京)，所需基本培养基为MS(Murashige & Skoog with Vitamins，Caisson labs，美国，批号：0619003)和WPM(McCown Woody Plant medium with vitamins，COOLABER，中国，批号：PM28151421)培养基。
2 方法
2.1 获取无菌外植体 选取栀子幼嫩茎尖2～3 cm为外植体，自来水冲洗干净后在超净工作台中进行后续灭菌操作。先用75%酒精浸泡30 s，无菌水洗3次，再用2%次氯酸钠消毒10～15 min，无菌水洗5～6次。将消过毒的外植体放在无菌滤纸上吸干表面水分，接种到不添加激素的MS培养基上启动培养，后转入无菌苗培养基上继续培养，无菌苗培养基[13]为MS+6-BA 1 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L，pH=5.8。, 百拇医药(田亚 徐志超 胡开治)
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