基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ序列位点特异性聚合酶链反应鉴别鹿茸及其伪品(2)
1.3 仪器恒温水浴锅(江南实验仪器厂,HH-2型);离心机(德国Eppendorf公司,MiniSpin型);电泳仪(日本TAKARA公司,Mupid-One型);凝胶成像系统(美国Wealtec公司,Dolphin-Doc型);核酸蛋白分析仪(日本岛津公司,Biospec-nano型)。
2 方法
2.1 鹿茸样品基因组DNA的提取
取鹿茸样品0.1 g,依次用1 mL 75%乙醇、l mL灭菌超纯水清洗,吸干表面水分,置于研钵中,加入液氮研磨成极细粉。取鹿茸样品极细粉70 mg,置于1.5 mL离心管中,使用天根血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA。提取步骤详见说明书,将DNA溶液收集到离心管中,即为鹿茸样品基因组DNA,置于-20 ℃冰箱中备用。
2.2 PCR扩增及序列测定
使用COI序列通用引物HCO2198:5′GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG 3′,LCO1490:5′TGATTTTTTGGTCACCCTGAAAGTTTA 3′扩增鹿茸样品的COI序列 ......
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