乙酰紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的研究(2)
1.4 实验方法1.4.1 细胞系与细胞培养 人前列腺癌PC-3细胞用含10%胎牛血清及P/S的PRMI-1640培养液在37 ℃、5% CO2,饱和湿度的培养箱中培养。待细胞满度约70%的时候,进行传代。
1.4.2 CCK-8法检测乙酰紫草素对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响 将PC-3细胞接种至96孔板,每组取8个复孔,待细胞贴壁生长24 h后,将浓度梯度为0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L、40 μmol/L、50 μmol/L的乙酰紫草素加入孔中,对照组加DMSO。同条件下处理24 h后,将40 μL CCK-8试剂加入孔中并在37 ℃下孵育4 h。随后,通过酶标仪在450 nm处测量吸光度,利用Prism 7.0软件计算细胞存活率及IC50值。时间梯度的检测中,以IC50值为处理浓度,分别以0 h、3 h、6 h、12 h、24 h加药,同样利用CCK-8法检测细胞存活率。
1.4.3 流式细胞术检测乙酰紫草素对前列腺癌PC-3细胞凋亡率 采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,将PC-3细胞以1×105/孔接种至6孔板 ......
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