牛膝促神经干细胞增殖的有效部位筛选(2)
1.2.2 牛膝多糖部位的制备 将1.2.1中的牛膝药渣烘干,加水煎煮,浓缩,浓缩液缓慢加乙醇并搅拌至含醇量为80%,沉淀用80%乙醇洗涤,经脱蛋白后制得牛膝多糖部位。1.2.3 牛膝正丁醇部位经大孔树脂洗脱的制备 牛膝正丁醇部位过AB-8型大孔树脂柱,以水和10%、30%、50%、70%、90%的乙醇进行梯度洗脱,经浓缩后得不同洗脱部位,依次编号为Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5和Fr.6。
1.2.4 完全培养基的配制 DMEM/F12、bFGF、B27和青鏈霉素配制成NSCs无血清的完全培养基。
1.2.5 药物的配制 牛膝的各部位均用完全培养基配制成1 000 μg/mL的储备液,过滤膜除菌,保存至4 ℃冰箱。实验前用完全培养基稀释成相应浓度的工作液。
1.2.6 NSCs原代培养 将孕鼠麻醉,取出胎鼠,置于75%乙醇中。在超净台内解剖胎鼠,取出大脑,分离海马组织并将其转移至DMEM/F12培养基中,剪碎,用无菌吸管吹打至无组织团块,加胰蛋白酶消化,10%胎牛血清终止消化,离心,弃上清,加完全培养基并吹打成细胞悬液,过200目细胞筛后得单细胞悬液 ......
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