扶正化瘀方体外给药方法及生物活性差异的探讨(3)
1.2.3.4 肝细胞过氧化损伤模型生化测定以及线粒体膜电位测定 将L-02诱导肝细胞损伤模型后(详见1.2.1.1),与25、50、100、200 μg/mL扶正化瘀各组工作液孵育18 h,每个浓度均设4个复孔。设正常对照组,模型组,不同浓度扶正化瘀组。CCK8试剂盒检测细胞活力;留取细胞上清,用生化试剂盒分别检测上清中的ALT、AST和LDH含量。另用无血清培养基清洗细胞2次,加入2.5 μg/mL工作浓度的JC-1,在37 ℃孵育30 min,PBS洗涤3次,5 min/次,荧光显微镜下529 nm和590 nm波长进行观察。1.2.3.5 巨噬细胞促炎模型一氧化氮NO、肿瘤坏死因子TNF-α含量测定 将RAW264.7细胞以LPS诱导炎性反应模型(详见1.2.1.2),并同时给予扶正化瘀工作液连续孵育24 h,每个浓度均设4个复孔。CCK8试剂盒检测细胞活力;留取细胞上清。按1∶1配置1%磺胺与0.1%N-1-萘基乙二胺盐酸混合液,再与细胞上清1∶1混合,根据NaNO2标准曲线,在540 nm波长下测定吸光度来确定一氧化氮含量。将BMDM细胞以30 000个/孔接种于96孔板 ......
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