二至丸对绝经后骨质疏松鼠的作用观察及可能机制研究(3)
1.2.3.5 各组血脂代谢指标 干预结束后每组随机选择3只大鼠,充分麻醉后取腹主动脉血,4 ℃,5 000 r/min,离心半径5 cm条件下离心10 min,取上清液利用全自动生化分析仪检测TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。1.2.3.6 骨组织Wnt/β-catenin通路 干预结束后每组随机选择3只大鼠,充分麻醉后处死,冰上快速取出右侧股骨,加入RIPA蛋白裂解液,匀浆机中匀浆30 min,将样本置于4 ℃,5 000 r/min,离心半径5 cm的条件下离心20 min,取上清液(总蛋白溶液),用BCA法进行蛋白浓度检测并得出各个样本上样量,并将样本加入电泳凝胶内进行跑胶,目的蛋白完全分离后转膜至PVDF膜上,加入5%脱脂奶粉进行条带封闭,2 h后用TBST漂洗条带,术后加入Wnt3a、LRP5、DKK1、RUNX2、β-catenin一抗抗体(均按照1∶1 000比例稀释),4 ℃,孵育过夜,TBST漂洗3次,加入羊抗兔二抗(1∶2 000稀释) ......
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