肖 潇 刘艳霞 危一飞 邢 玉 滕秀香

    (1 北京中医药大学第二临床医学院，北京，100078； 2 首都医科大学附属北京中医医院妇科，北京，100010； 3 北京中医药大学东方医院妇科，北京，100078； 4 中国中医科学院望京医院骨科，北京，100102)

    卵巢储备功能减退是指卵巢内卵母细胞数量减少和(或)质量下降，其临床表现为月经稀发或频发，以及闭经，甚至卵巢早衰导致生育能力丧失[1-2]。卵巢储备功能下降可导致卵泡发育异常[3]。研究发现卵巢颗粒细胞参与调节卵泡的发育和生长，对卵泡发育至关重要，颗粒细胞凋亡增加是导致卵泡发育异常及卵巢功能降低的关键因素之一[4-6]。已有大量研究证实雷公藤的生殖毒性可引起卵巢功能减退[7-8]。近年来中药治疗卵巢功能减退的临床疗效被大量报道，中药单体及复方抑制雷公藤多苷所诱导的卵巢颗粒细胞凋亡，改善卵巢储备功能的实验研究亦被学者验证[9-14]。益肾疏肝汤被证实对卵巢储备功能减退以及卵巢早衰等具有显著的临床效果[15-17]。但其作用机制仍不清楚，本研究将通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞，探究益肾疏肝汤对雷公藤多苷诱导的卵巢颗粒细胞凋亡的影响，并深入探究其可能的作用机制，以期为临床上治疗卵巢功能减退相关疾病提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 取26只雌性健康的SD大鼠，日龄22～25 d，体质量50～66 g，购自于斯贝福(北京)生物技术有限公司；生产许可证：SCXK(京)2019-0010。所有大鼠均饲养在动物房中，适应性饲养1周后进行后续实验。本实验涉及的动物实验已由北京隆安实验动物中心动物伦理委员会审查批准(伦理审批号：BJlongan-L-L-0007)。

    1.1.2 药物 益肾疏肝汤是由女贞子15 g、熟地黄10 g、墨旱莲15 g、北沙参20 g、石斛10 g、川续断15 g、桑寄生15 g、菟丝子15 g、酒白芍10 g、月季花6 g、柴胡5 g、白梅花10 g、丹参10 g、桃仁10 g、瞿麦6 g、葛根6 g、甘草6 g组成，由首都医科大学附属北京中医医院提供，最终大鼠用药生药粉剂量为16.38 g/kg/d。戊酸雌二醇(上海源叶生物科技有限公司，货号：S52227-1 g)，雷公藤多苷片(上海复旦复华药业有限公司，国药准字Z31020415)。

    1.1.3 试剂与仪器 水合氯醛(上海易恩化学技术有限公司，货号：R008072-500 g)，孕马血清促性腺激素(PMSG)(北京索莱宝科技有限公司 ......