多重PCR法检测金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因
葡菌,白细胞,1材料与方法,1菌株来源,2细菌鉴定质控菌株,3仪器与试剂,4引物设计,5细菌DNA的提取,6多重PCR扩增体系及反应条件,7序列测定,2结果,1多重PCR扩增产物的电泳分析,2PVL基因阳性
王凤玲,刘国华,侯英荣(河北省沧州中西医结合医院检验科,河北沧州 061001)
感染性疾病是全球最常见的疾病,金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)是引起化脓性感染的主要病原菌。随着抗菌药物的广泛应用,金葡菌的耐药性逐渐增加,其中耐甲氧西林金葡萄菌(MRSA)的检出尤为明显。MRSA的耐药机制主要是它获得了含有mecA耐药基因的可移动遗传元件,即SCCmec盒。金葡菌能产生和分泌多种毒素[如杀白细胞毒素(PVL)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)、葡萄球菌肠毒素及表皮剥脱性毒素等],这些毒素已被证明与食物中毒、中毒性休克、皮肤烫伤样综合征及作为超抗原功能有关[1]。因此,非常有必要对金葡菌进行耐药基因及致病毒素基因的检测,防止此类细菌的播散。我科对我院临床分离的金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因PVL基因和TSST-1基因进行检测,并对其所引起的感染进行分析。
1 材料与方法
1.1 菌株来源
84株金葡菌均为我科2008年1月~2009年1月从临床标本中分离的菌株,分别来源于痰液、脓液、血液、分泌物、腹腔引流物、肾囊肿穿刺液、胸腔积液、脓疱液、疱液、导管下段及导管尖端,经美国DADE-BERING公司WalkAway-40全自动微生物分析仪鉴定核实为金葡菌。
1.2 细菌鉴定质控菌株
金葡菌ATCC25923,购于卫生部临床检验中心。
1.3 仪器与试剂
WalkAway-40全自动微生物分析仪(美国DADE-BERING公司产品),PCR仪(美国Eppendorf公司产品),测序仪(美国ABI公司) ......
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