王朝莉，李 丽，陈 果，杨尚君，敬保迁，任碧轩，冯 莉

    (川北医学院分子生物学研究所，四川南充 637000)

    川北地区胃癌特异性表达基因的克隆

    王朝莉，李 丽，陈 果，杨尚君，敬保迁*，任碧轩，冯 莉

    (川北医学院分子生物学研究所，四川南充 637000)

    目的：构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库，筛选胃癌特异表达基因。方法：取胃低分化腺癌组织和癌旁正常黏膜组织，提取总RNA，逆转录cDNA，进行SSH构建消减文库获得序列标签，与载体连接、克隆、筛选、测序及同源性检索。结果：以癌旁正常黏膜组织为driver、胃低分化腺癌组织为tester成功构建cDNA消减文库，测序结果与公共数据库中已知基因和人类EST比较，获得5个特异性序列标签(NBPF1、FAM48A、RXFP2、ACTB和QDPR)。结论：应用SSH法成功构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库，初步筛选胃癌部分表达基因，为寻找川北地区胃癌发生发展的特异性基因奠定基础。

    胃癌；SSH；特异基因

    胃癌是严重危害人类健康和生命的恶性肿瘤之一，我国每年有20余万例新发胃癌患者，占全部恶性肿瘤患者的17.2%，其发病率居所有恶性肿瘤发病率之首。每年胃癌患者死亡人数占所有癌症死亡人数的23.93%。由于胃癌起病隐匿，发生的确切机制至今尚不清楚，临床早期70%以上毫无症状，中晚期才引起相应的临床症状，且易转移与复发，预后极差。目前最为紧迫的是寻找对胃癌检测灵敏度高、特异性好的检测方法，使其能对胃癌高危险患者进行筛查、对早期胃癌能特异诊断、对病情发展和疗效可追踪考核，从而提前对高危患者给予干预治疗。本实验采用SSH技术，以胃低分化腺癌组织为tester，癌旁正常黏膜组织为driver，期望克隆出可能载有高度特异性目的片段，探索川东北地区胃癌不同发展阶段的基因表达变化，为进一步阐明胃癌的发病机制、开展胃癌的基因诊断和基因治疗提供重要的物质基础。

    1 材料与方法

    1.1 标本收集

    胃癌组织和癌旁正常黏膜组织来源于川北医学院附属医院的胃癌患者，胃癌组织标本术后经川北医学院附属医院病理科鉴定为低分化腺癌。

    1.2 主要化学试剂

    RNeasy Mini Kit(Qiagen)提取总RNA；PCR Select cDNA Subtraction试剂盒，50×PCR EnzymeMix，AdvantagePCRCloning试剂盒为美国 Clontech公司产品；NucleoSpin ExtractⅡ(Clontech)和PCR Purification(Qiagen)纯化相应产物；抑制性PCR产物以T/A方式接入pGEM-T(Promega)载体；文库扩增使用感受态大肠杆菌JM109；氨苄青霉素(50 mg/L)及显色剂X-Gal/IPTG(Gibco)筛选克隆 ......