苑福升 ，刘 健 ，高 琦 ，朱本清 ，王海涛 ，闫 鹏 ，杨小玉

    1.吉林大学中日联谊医院骨科，吉林长春 130021；2.天津人民医院骨科，天津 300211

    脊髓缺血再灌注损伤是脊柱脊髓外科领域研究的热点，以往的研究主要集中在阐述机制、解释空间构造方面。我们建立蛋白组学和代谢组学联合研究平台，试图从新的角度阐释脊髓缺血再灌注损伤时间规律。

    1 蛋白组学方法

    1.1 仪器

    Amersham公司IPGphor等电聚焦仪、Ettan DALT Twelve电泳系统、蛋白核酸分析仪、超声破碎仪。Beckman冷冻离心机，PROTEAN IEF cell型等电聚焦仪、PROTEAN-11(R)ⅪCell型垂直电泳槽、凝胶成像系统为Bio-Rad产品，Thermo冷凝水循环仪质谱仪，Applied Biosystems产品ABI-4800型反射式基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱，Typhoon 9410扫描仪及图像分析软件DeCyder v.5.02(Amersham Bioscience)。

    1.2 试剂

    Cy2、Cy3、Cy5荧光染料购自Amersham公司；DMF购于SIGMA 公司；裂解液(7 mol/L 尿素、2 mol/L 硫脲、4%CHAPS)、水化液(8 mol/L尿素、2%CHAPS)、平衡母液(6 mol/L尿素、50mmol/L Tris-HCl、20%甘油、2%SDS)、RCDC 定量试剂盒、10× 电 泳 缓 冲 液 (250 mmol/L Tris、1.92 mol/L glycine、1%SDS)、Bradford定量试剂盒、30%丙烯酰胺(丙烯酰胺∶甲叉双丙烯酰胺=29∶1)、1.5 mol/L Tris-HCl (pH 8.8)、10%SDS 均是Bio-Rad公司产品。

    1.3 实验方法

    1.3.1 模型制备和脊髓标本采集 清洁级健康成年新西兰大白兔由吉林大学实验动物中心提供，雌雄不限，体重2.5～3.0 kg。随机将实验动物分3组：假手术组(I0R0)、缺血30 min组(I30R0)、缺血再灌组(I30R6、12、24、48)，每组 6 只。 将其用10%的水合氯醛麻醉，开腹后用血管夹在左肾动脉分叉下阻断腹主动脉，使脊髓腰骶段缺血。假手术组和缺血30 min组于术后麻醉下取脊髓L4～5节段，缺血再灌注组缺血30 min后去除血管夹闭创，模拟再灌注。再灌注6、12、24、48 h麻醉下活体取脊髓L4～5节段 ......