曹丽芝，曾 勇，任华益，陈金燕

    湖南省肿瘤医院药学部，湖南长沙 410013

    卵巢原发性恶性肿瘤中有60%～80%病理类型属于上皮性卵巢癌。卵巢癌作为最常见的女性生殖系统恶性肿瘤，由于其临床发病隐匿，且缺乏特异性的早期发病指征，晚期卵巢癌患者生存率极低，仅达到25%左右[1-3]。目前，上皮性卵巢癌患者的预后以及生活质量均无法得到很好的提升。20世纪90年代以来，多项大规模的临床研究提示，采用紫杉醇联合顺铂作为晚期卵巢癌的标准化疗方案对于该类患者的治疗具有及其重要的地位。但是，在上述联合化疗过程中，因为患者表现的对铂类药物耐药的现象导致疗效不佳是众多临床学者无法回避的客观事实。铂类药物作为一类卵巢癌的化疗过程中最有效的细胞毒药物，通过形成铂-DNA络合物，导致DNA致命性损伤，诱导细胞凋亡发挥作用[4-5]。铂类药物虽然耐药机制十分复杂，最新的研究已经明确DNA损伤修复是其最主要的机制之一。在DNA的损伤修复过程中，DNA聚合酶发挥至关重要的作用，其中聚合酶η起最关键的作用。DNA聚合酶通常分为经典聚合酶以及跨损伤复制聚合酶两种，跨损伤复制聚合酶尤其是聚合酶η蛋白能够在细胞DNA受到损伤的情况下保证细胞的复制得以顺利进行，在保护细胞的同时也造成了耐药现象的发生[6-8]。根据以上背景，笔者认为从聚合酶η蛋白的表达情况出发，分别从基因、蛋白水平研究该聚合酶与顺铂药物敏感性的关系，结合顺铂临床疗效的观察，对于分析顺铂耐药的机制有着积极的意义。本文在基础研究水平，通过MTT法比较siRNA沉默目的基因前后OVCR3细胞对于铂类药物的敏感性，首先验证DNA聚合酶η蛋白与细胞顺铂敏感性的关系。同时，通过分析病理组织标本中聚合酶η蛋白表达情况，观察其与临床资料的相关性。旨在从基础以及临床两个水平分析聚合酶η蛋白在卵巢上皮癌顺铂耐药过程中发挥的作用，为下一步攻克铂类药物耐药现象提供前期研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞 OVCR3细胞购自上海中科院细胞生化所。

    1.1.2 病理组织来源 选取我院入院治疗的卵巢上皮癌50例患者手术切除病理组织标本。患者年龄23～63岁，平均43.7岁。所有组织标本经病理证实为上皮性卵巢癌。上皮性卵巢癌按FIGO标准分期和组织学分级(GRADE)。

    1.1.3 主要试剂 RNA干扰试剂盒 (Silencer TM siRNA Construction Kit)购自美国Ambion公司；阳离子脂质体转染试剂盒Lipofectamine TM 2000购自Invitrogen公司；噻唑蓝(MTT)(Sigma公司)；RT-PCR 试剂盒购自 Sigma公司；目的蛋白鼠单克隆抗体为美国ADI抗体公司产品 ......