鲁秦安，康龙丽

    西安文理学院，陕西西安 710065

    肿瘤的侵袭与转移是恶性肿瘤发生、发展的重要阶段，有证据表明90%以上的恶性肿瘤最终都是因肿瘤的侵袭转移或复发而导致死亡。近年来研究发现许多基因异常表达与肿瘤的发生、发展有关，Snail基因就是其中之一。Snail是Snail家族的第一个成员，近年来大量的研究表明，Snail在食管癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌等恶性肿瘤中高表达[1-5]，并且在上皮-间质转型(EMT)并促进侵袭转移中发挥着重要的作用[6]，但是目前国内外极少有关Snail在人类食管癌方面的研究。

    本研究通过siRNA干扰的方法抑制人食管癌细胞EC9706的Snail基因的表达，进一步观察Snail基因对人食管癌细胞侵袭能力的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    食管癌细胞EC9706(由中国医学科学院国家分子肿瘤实验室提供)用含有10%新生牛血清的DMEM高糖培养基(购自GIBCO公司)在37℃的培养箱中培养，细胞贴壁生长，隔夜换液，2～3 d传代1次，取对数生长期细胞进行实验。LipofectamineTM 2000购自 Invitrogen公司，Snail-siRNA购自广州锐博生物公司，Trizol试剂购自Invitrogen公司，RTPCR试剂盒购自Promega公司，内参照GAPDH引物及Snail引物由广州锐博生物公司合成，Transwell孔板购自美国Corning公司。

    1.2 细胞转染

    由广州锐博生物公司合成3条针对Snail的siRNA序列，筛选出其中1条有效的siRNA序列，参照说明书进行Snail-siRNA转染。Snail-siRNA序列正义链：5’-GCUGCAGGACUCUAAUCCAdTdT-3’；反义链：5’-UGGAUUAGAGUCCUGCA GCdTdT-3’。将细胞分为三组，实验组：转染时加入Snail特异性siRNA；空白对照组：转染时加入无血清1640培养液500 μl；阴性对照组：转染时加入非特异性siRNA ......