Snail基因与食管癌细胞侵袭迁移能力的相关性分析
划痕,空白对照,1材料与方法,2细胞转染,3RT-PCR法检测SnailmRNA的表达,4Westernblotting法检测Snail蛋白的表达,5细胞划痕实验,6Transwell小室体外侵袭实验,7统计
鲁秦安,康龙丽西安文理学院,陕西西安 710065
肿瘤的侵袭与转移是恶性肿瘤发生、发展的重要阶段,有证据表明90%以上的恶性肿瘤最终都是因肿瘤的侵袭转移或复发而导致死亡。近年来研究发现许多基因异常表达与肿瘤的发生、发展有关,Snail基因就是其中之一。Snail是Snail家族的第一个成员,近年来大量的研究表明,Snail在食管癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌等恶性肿瘤中高表达[1-5],并且在上皮-间质转型(EMT)并促进侵袭转移中发挥着重要的作用[6],但是目前国内外极少有关Snail在人类食管癌方面的研究。
本研究通过siRNA干扰的方法抑制人食管癌细胞EC9706的Snail基因的表达,进一步观察Snail基因对人食管癌细胞侵袭能力的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
食管癌细胞EC9706(由中国医学科学院国家分子肿瘤实验室提供)用含有10%新生牛血清的DMEM高糖培养基(购自GIBCO公司)在37℃的培养箱中培养,细胞贴壁生长,隔夜换液,2~3 d传代1次,取对数生长期细胞进行实验。LipofectamineTM 2000购自 Invitrogen公司,Snail-siRNA购自广州锐博生物公司,Trizol试剂购自Invitrogen公司,RTPCR试剂盒购自Promega公司,内参照GAPDH引物及Snail引物由广州锐博生物公司合成,Transwell孔板购自美国Corning公司。
1.2 细胞转染
由广州锐博生物公司合成3条针对Snail的siRNA序列,筛选出其中1条有效的siRNA序列,参照说明书进行Snail-siRNA转染。Snail-siRNA序列正义链:5’-GCUGCAGGACUCUAAUCCAdTdT-3’;反义链:5’-UGGAUUAGAGUCCUGCA GCdTdT-3’。将细胞分为三组,实验组:转染时加入Snail特异性siRNA;空白对照组:转染时加入无血清1640培养液500 μl;阴性对照组:转染时加入非特异性siRNA ......
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