何道辉，赵杰才

    广东省东莞市大朗医院骨科，广东东莞 523770

    骨肉瘤(osteosarcom)是最常见的原发性骨恶性肿瘤，血运丰富，发展迅速，可早期通过血行转移，尤其是肺转移，给治疗带来极大困难。研究表明，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及其受体(vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR-2)在骨肉瘤中高表达，小窝蛋白-1(caveolin-1)高度表达在低转移性骨肉瘤细胞中。但是，caveolin-1在VEGF调控的肿瘤血管生成中的具体作用及机制尚待深入研究。本实验以骨肉瘤细胞株(SOSP-9607)为细胞模型，研究caveolin-1对VEGF孵育的SOSP-9607细胞株的VEGFR-2在信使核糖核酸(mRNA)及蛋白水平表达的影响，为临床选择合适的靶点治疗骨肉瘤的血管生成提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    SOSP-9607细胞株购自中山大学实验动物中心；Roswell Park Memorial Institute-1640(RPMI 1640)培养基购于 Gibco-BRL公司，按说明书配制，4℃保存；特级胎牛血清购于以色列Kibbutz Beit Haemek公司，分装，-20℃保存；反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒购于Fermentas公司，引物由广州瑞真生物技术有限公司合成；caveolin-1小片段干扰核糖核酸(siRNA)由广州复能基因公司合成、筛选；caveolin-1、VEGFR-2(兔抗人)一抗购于美国Sigma公司，二抗(山羊抗兔)购于广州美津生物公司。其余试剂由本实验室自行配制。

    1.2 细胞培养及分组

    SOSP-9607细胞按106个/ml接种于25 cm2塑料培养瓶中 ......