姚志文 刘 唯 程由勇 李红玖 李春华 于大海

    1.广州医学院附属深圳沙井医院口腔科，广东 深圳 518104；2.广西医科大学口腔医学院，广西 南宁 530021021

    血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)能促进舌癌(carcinoma of tongue)中血管的生成，与舌癌的生长与转移密切相关[1-2]，抑制VEGF基因的表达可望抑制舌癌血管的生成，从而抑制舌癌细胞的增殖和转移。本研究以VEGF基因为靶点，构建VEGF-siRNA表达载体，转染舌癌Tca8113细胞，研究其对Tca8113细胞VEGF基因表达的抑制作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    Tca8113细胞株(四川大学口腔疾病研究国家重点实验室)，Psilencer 2.1-U6-neo真核表达载体(美国 Ambion公司)，脂质体 Lipofectamine 2000(美国 Invitrogen 公司)，质粒小剂量提取试剂盒(美国Omega公司)，大肠杆菌DH5α(武汉晶赛生物公司)，G418试剂(美国Gbico公司)，人VEGFELISA试剂盒 (上海森雄科技实业有限公司)，限制性内切酶、T4 DNA连接酶 (美国NEB公司)，HRP标记兔抗人的IgG抗体(美国Gbico公司)，鼠抗人VEGF的单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 血管内皮细胞生长因子基因特异的siRNA表达载体构建 根据基因数据库已知VEGF mRNA序列，参考siRNA的设计有关文献[3]，设计针对VEGF基因不同剪切子的公共靶点，根据所选靶点人工合成VEGF基因RNAi靶序列(5′-GATAGAGCAAGACAAGAAA-3′)及其互补的反义链。以及一条实验对照序列(即无关序列HK：5′-GACTTCATAAGGCGCATGC-3')及其互补的反义链 ......