陈利锋 赵映前 刘建忠 胡爱萍

    1.湖北中医药大学，湖北武汉 430065；2.湖北省中医院，湖北武汉 430070

    肝干细胞是体内存在的一种具有自我增殖能力和多向分化潜能的干细胞，可以分化为肝细胞和胆管上皮细胞等多种细胞。肝干细胞可参与肝脏的修复与重建，也是肝细胞移植、生物人工肝的重要细胞来源。近年来，人们发现肝干细胞移植对急慢性肝脏疾病有明确的治疗作用，使得肝干细胞的研究成为热点[1-2]。研究中选用西洋参、牛黄配伍，具有“益气养阴、清热解毒”之功，现代药理研究证明牛黄、西洋参在改善肝功能、降低转氨酶、抑制肿瘤细胞增殖等方面具有很好疗效，但对肝干细胞的作用尚不十分清楚[3]。本实验研究不同浓度牛黄参含药血清对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖、诱导分化作用，观察在诱导分化过程中细胞因子受体表达的变化，探讨牛黄、西洋参复方对肝干细胞增殖、分化的影响，进一步揭示益气解毒法对WB-F344细胞的作用机制。

    1 材料与试药

    1.1 动物

    48只 SPF级雄性 Wistar大鼠，体重 180～200 g，由湖北省实验动物研究中心提供，许可证号SCXK(鄂)2008-0005。鼠肝干细胞系WB-F344购自上海复祥生物科技有限公司。

    1.2 试药

    体外培育牛黄、西洋参、牛黄参胶囊均由武汉健民大鹏药业有限公司提供。DMEM高糖液体培养基(HYCLONE)，10%灭活的特优级胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，无菌磷酸盐(PBS)缓冲液(武汉博士德)，青霉素、链霉素双抗(西化仪北京科技有限公司)。胰蛋白酶、MTT、DMSO(美国GIBCO公司分装)。地塞米松磷酸钠注射液(湖北天药药业股份有限公司)，胰岛素(安徽宏业药业有限公司)，Trizol(总RNA抽提剂)、一抗稀释液及二抗稀释液(碧云天生物技术研究所生产)，上、下游引物(BIONEER)，Fermentas逆转录试剂盒(美国 MBI)。 HGF、EGF(美国派普泰克公司)。 兔抗鼠的 HGFR、EGFR 多克隆抗体、兔抗鼠的 TGFβR1、TGFβR2多克隆抗体(美国BIOWORLD公司)，羊抗鼠的EGF多克隆抗体(美国SANTA CRUZ公司)，辣根过氧化物酶HRP标记的兔抗羊抗体和山羊抗兔的二抗(美国BIOWORLD公司)。考马斯亮蓝G-250、考马斯亮蓝R-250、Tween-20(武汉华顺生物科技有限公司)，预染标准分子量蛋白Marker(FERMENTAS 公司)、丽春红 S(SIGMA 分装) ......