孙立业 毛 璇 张冬娟 孙 博 管又飞 颜贤忠

    1.军医进修学院，北京 100853；2.国家生物医学分析中心，北京 100850；3.北京大学医学部生理学与病理生理学系，北京 100083

    糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见和最严重的并发症之一，同时也是导致终末期肾损害的重要因素[1]。目前，临床上对糖尿病肾病的诊断主要依赖于对尿微量白蛋白排泄率(UAER)的检测，但因为尿微量白蛋白的含量会受肥胖、胰岛素抵抗等诸多因素影响而存在着局限性[2]。糖尿病肾病的发病机制目前尚无统一定论，当前研究主要集中在糖代谢、脂代谢、氧化应激[3-5]等方面。代谢组学作为一种全面研究生物机体或组织细胞动态代谢的技术手段，近年来在疾病的诊断、标志物筛查以及发病机理的研究等方面已有广泛的应用[6-8]。本文采用基于核磁共振(NMR)的代谢组学技术对db/db糖尿病肾病小鼠血浆中内源性小分子代谢物进行分析，结合模式识别技术确定糖尿病肾病小鼠机体由于病理刺激而产生的代谢紊乱，进行潜在代谢标志物分析，并对其病理机制进行探讨，为临床的诊疗提供可能的新思路，新方法。

    1 资料与方法

    1.1 实验动物及分组

    糖尿病肾病模型db/db小鼠(试验组)6只，体重(53.9±2.1)g；db/m 小鼠(对照组)6 只，体重(26.8±2.3)g。所有小鼠均为雄性，周龄为14～16周，由北京大学医学部提供。动物饲养房12 h昼夜交替，温度为25～27℃，动物自由摄食饮水。

    1.2 试剂和仪器

    重水(D2O)购自美国 Norell公司；2，2，3，3，三甲基甲硅烷基丙酸(TSP)购自加拿大默克公司；戊巴比妥钠和肝素钠购于国药集团化学试剂有限公司。VarianUNITYINOVA 600 MHz超导脉冲傅立叶变换核磁共振谱仪，购自美国瓦里安公司；Eppendorf 5810R离心机，购自德国Eppendorf公司。

    1.3 血浆样本制备和处理

    对小鼠进行解剖，各组小鼠用戊巴比妥钠(2%，2.5 mL/kg)麻醉后，于心脏动脉取血，使用肝素钠抗凝，3 500 r/min离心15 min后得到血浆，取250 μL血浆，13 000 r/min离心10 min，取上清液 200 μL，加入 100 μL 的 TSP 重水溶液(1 mg/mL)和300 μL D2O，涡旋混匀后加入至5 mm核磁管中，用于核磁共振检测。

    1.4 核磁共振数据采集与预处理 ......